彈性蛋白、原纖維蛋白-1及膠原在腹股溝疝腹橫筋膜中的表達(dá)與分布.pdf

1、目的:比較彈性蛋白(Elastin)、原纖維蛋白-1(Fibrillin-1)與膠原在腹股溝直疝及斜疝患者腹橫筋膜的表達(dá)與分布,以期獲得對(duì)腹股溝疝尤其直疝病理生理的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。
　　 方法:30例腹橫筋膜組織取自2008年12月至2009年10月在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院行無(wú)張力疝修補(bǔ)術(shù)患者。其中直疝13例(男11例,女2例),斜疝17例(男13例,女4例)?；颊吣挲g28-67歲,并排除其他系統(tǒng)疾病(如糖尿病,系統(tǒng)感染,惡性腫瘤等)及

2、吸煙患者。腹橫筋膜取材在遠(yuǎn)離疝囊的相對(duì)正常的內(nèi)側(cè)腹橫筋膜處切取標(biāo)本0.7-1cm2,標(biāo)本切取后放入100mmol/L中性福爾馬林溶液中固定備用。所用標(biāo)本經(jīng)100mmol/L福爾馬林溶液固定24小時(shí),修整組織塊常規(guī)方法制成蠟塊。蠟塊連續(xù)切片后用HE染色法觀(guān)察所取組織情況。分別應(yīng)用鼠抗人彈性蛋白單克隆抗體及兔抗人Fibrillin-1多克隆抗體進(jìn)行免疫組化,檢測(cè)腹橫筋膜組織中彈性蛋白及Fibrillin-1的表達(dá)與分布情況。以PBS溶液代替

3、一抗做空白對(duì)照。切片經(jīng)脫蠟后PBS沖洗,用過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性,微波抗原修復(fù)沖洗后滴加50μl一抗,室溫下孵育60 min。應(yīng)用即用型MaxVisionTM試劑盒,按其說(shuō)明書(shū)操作。應(yīng)用DAB顯色法。顯色后采用Olympus BX51型光學(xué)顯微鏡觀(guān)察并攝片。應(yīng)用MASSON三色法對(duì)膠原進(jìn)行染色。染色后用顯微鏡觀(guān)察,攝取圖像。圖像采用ImagePro Plus6.0軟件進(jìn)行分析,每張切片隨機(jī)取10個(gè)40×10倍視野,測(cè)定每個(gè)視

4、野累計(jì)光密度(IOD)值,以10個(gè)視野的平均值來(lái)表示。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),兩組間比較采用t檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:HE染色顯示所取組織為腹橫筋膜。免疫組化染色顯示:直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白排列紊亂,斷裂,部分區(qū)域聚集。斜疝患者腹橫筋膜彈性蛋白和直疝相比排列較整齊,呈連續(xù)分布。原纖維蛋白-1在直疝和斜疝患者腹橫筋膜的分布情況和彈性蛋白相似。Masson三色法顯示膠原在直疝患者腹橫筋膜排

5、列較斜疝紊亂,且含量減低。
　　 用圖像分析系統(tǒng)測(cè)得累計(jì)光密度(IOD)值顯示直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白含量(2526.76±701.74)明顯低于斜疝(3035.10±648.02)患者,差異具有顯著性(P＜0.05);Fibrillin-1的含量(2265.22±574.56)在直疝患者腹橫筋膜明顯低于斜疝(2735.10±639.73)患者,差異具有顯著性(P＜0.05)。膠原含量(64466.40±19022.17)在直疝