用IgE受體結(jié)合位點(diǎn)多聚抗原肽抑制小鼠過(guò)敏性哮喘.pdf

1、目的：IgE在哮喘，季節(jié)性過(guò)敏性鼻炎以及其他過(guò)敏性疾病的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵的介導(dǎo)作用。當(dāng)變應(yīng)原初次進(jìn)入機(jī)體后，選擇性誘導(dǎo)變應(yīng)原特異性B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體應(yīng)答，而血清中游離的IgE可在不結(jié)合抗原的情況下通過(guò)其Fc片段與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面受體結(jié)合使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。機(jī)體再次接觸變應(yīng)原后，多價(jià)變應(yīng)原與致敏細(xì)胞表面兩個(gè)或者兩個(gè)以上相鄰的IgE抗體結(jié)合，使細(xì)胞膜表面受體發(fā)生交聯(lián)，觸發(fā)致敏細(xì)胞脫顆粒，釋放及合成生物活性介質(zhì)，從而引起局部或者

2、全身過(guò)敏反應(yīng)，癥狀重者可導(dǎo)致過(guò)敏性休克，危及生命。過(guò)敏性疾病已嚴(yán)重干擾了患者的工作和生活，由此帶來(lái)的社會(huì)負(fù)擔(dān)也是相當(dāng)可觀的。由于IgE在變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生發(fā)展環(huán)節(jié)中的重要作用，目前已經(jīng)成為抗變態(tài)反應(yīng)性疾病治療的一個(gè)新的靶點(diǎn)和研究熱點(diǎn)。IgE的分子結(jié)構(gòu)已清楚，在人IgE抗體中與高親和力受體以及低親和力受體結(jié)合的位點(diǎn)位于Cε3結(jié)構(gòu)域，與IgE分子Cε3結(jié)構(gòu)域相關(guān)的主動(dòng)免疫策略由于具備了特異性封閉與疫苗治療的持久性從而越來(lái)越受到重視。以此疫

3、苗來(lái)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)IgE受體結(jié)合位點(diǎn)的抗體，通過(guò)抗原抗體結(jié)合產(chǎn)生的原子空間排列效應(yīng)或誘導(dǎo)的構(gòu)像改變來(lái)封閉IgEFc片段上與IgEFc受體結(jié)合的部位，進(jìn)而阻斷由IgE介導(dǎo)的哮喘效應(yīng)途徑。本實(shí)驗(yàn)就IgE分子受體結(jié)合位點(diǎn)多聚抗原肽疫苗免疫對(duì)過(guò)敏原所致的哮喘小鼠氣道炎癥的作用展開(kāi)探討。 方法：聯(lián)合運(yùn)用多種B細(xì)胞表位分析方法預(yù)測(cè)表位，綜合分析各種結(jié)果后確定合成肽的序列和長(zhǎng)度，人工合成人IgE分子Cε3區(qū)域內(nèi)抗原性較強(qiáng)的和實(shí)驗(yàn)相關(guān)小鼠的同

4、源性的多聚抗原肽疫苗，并以此疫苗來(lái)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)IgE受體結(jié)合位點(diǎn)的抗體，以使機(jī)體打破對(duì)IgE的免疫耐受，主動(dòng)產(chǎn)生抗IgE抗體，進(jìn)而阻斷由IgE介導(dǎo)的哮喘效應(yīng)途徑。具體方法為用多聚抗原肽免疫新西蘭大白兔檢驗(yàn)其免疫原性。以不同佐劑、不同劑量的多聚抗原肽免疫BALB/c小鼠，確定最適宜的免疫劑量。將小鼠隨機(jī)分為健康(H)對(duì)照組、無(wú)關(guān)肽免疫(IR)哮喘對(duì)照組、弗氏佐劑(F)哮喘對(duì)照組和多聚抗原肽(P)免疫后哮喘組，后三組采用卵清蛋白(OVA

5、)腹腔致敏和連續(xù)5天同一時(shí)間滴鼻激發(fā)建立哮喘模型。造模48h收獲小鼠肺泡灌洗液(BAL)和肺組織，觀察肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)百分比和上清中IL-4濃度；觀察肺組織病理切片，分析肺內(nèi)炎癥情況。分離血清，ELISA法檢測(cè)血清中IgE含量變化。觀察多聚抗原肽對(duì)小鼠耳廓注射OVA導(dǎo)致的腫脹程度的影響。觀察疫苗免疫后對(duì)過(guò)敏原刺激后的小鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒百分率的影響。觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)各組小鼠體重和肺濕重的影響。 結(jié)論