巨噬細胞移動抑制因子在過敏性哮喘中的表達及意義.pdf

1、支氣管哮喘是常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，近年來，隨著空氣污染的加劇，患病率在全球逐年上升，給全球帶來嚴重的經(jīng)濟負擔(dān)和社會負擔(dān)，成為日益嚴重的公共衛(wèi)生問題。
　　過敏性哮喘是支氣管哮喘疾病中最常見的類型，常以血清免疫球蛋白E(IgE)增高、粘液高分泌、氣道高反應(yīng)性(airway hyper reactivity，AHR)為主要特征，嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、肥大細胞等多種炎性細胞、炎癥介質(zhì)和細胞因子網(wǎng)絡(luò)共同參與了其發(fā)病機制。

2、r>　　雖然Th2型淋巴細胞和其相關(guān)的細胞因子（如IL-4、IL-5、IL-13等）在過敏性哮喘的發(fā)病機制中發(fā)揮了主要作用，但近年來，巨噬細胞以及與巨噬細胞相關(guān)的細胞因子在過敏性哮喘中的作用得到更多重視和研究。巨噬細胞移動抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）是主要來源于單核細胞和巨噬細胞的細胞因子，為一種上游的前炎因子和促炎因子，可促進多種炎癥因子的分泌，并參與多種疾病的發(fā)病機

3、制。研究表明，MIF參與了過敏性哮喘的疾病進程，可調(diào)節(jié)Th2型細胞因子的表達，在過敏性哮喘的發(fā)病機制中發(fā)揮了重要作用。
　　為進一步了解MIF在過敏性哮喘發(fā)病機制中的作用，本課題分別在過敏性哮喘患者和過敏性哮喘大鼠模型中進行了研究，共分為兩部分:第一部分:過敏性哮喘急性發(fā)作期患者血清MIF、嗜酸性粒細胞趨化因子-2(Eotaxin-2)和IgE的表達及相關(guān)性研究;第二部分:鈍化核因子-κB(NF-κB)的活化對過敏性哮喘大鼠肺組織

4、MIF及血清IL-4表達的影響。探討MIF在過敏性哮喘疾病中的作用和意義。
　　第一部分:過敏性哮喘急性發(fā)作期患者血清MIF、Eotaxin-2和IgE的表達及相關(guān)性研究
　　方法:
　　選取2012年9月至2015年10月鄭州市第二人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科過敏性哮喘急性發(fā)作期住院患者30例（哮喘組）和健康對照組25例，分別抽取哮喘組治療前后和健康對照組的外周靜脈血，檢測所有受試者血清MIF、Eotaxin-2、IgE的蛋白水

5、平和外周血嗜酸性粒細胞比率(peripheral blood eosinophil ratio，EOS％)，同時測定治療前后哮喘患者的肺功能，對治療前后的相關(guān)指標(biāo)進行對比研究和相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　1.哮喘組治療后各項肺功能指標(biāo)(包括FVC％ pred、FEV1、FEV1％ pred、FEV1/FVC)優(yōu)于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.哮喘組治療前血清MIF水平顯著高于治療后和健康對照組，

6、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);治療后血清MIF水平與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.哮喘組治療前血清Eotaxin-2水平顯著高于治療后和健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);治療后血清Eotaxin-2水平與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.哮喘組治療前血清IgE水平顯著高于治療后和健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);治療后血清IgE水平仍高于健康

7、對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.哮喘組治療前EOS％水平顯著高于治療后和健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;治療后EOS％水平與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.Pearson相關(guān)性分析顯示，哮喘組血清MIF分別與FVC％ pred、FEV1、FEV1％pred、FEV1/FVC呈負相關(guān)(P＜0.05);哮喘組血清Eotaxin-2分別與FVC％ pred、FEV1、F

8、EV1％ pred、FEV1/FVC呈負相關(guān)(P＜0.01);哮喘組血清IgE分別與FEV1％ pred、FEV1/FVC呈負相關(guān)(P＜0.05)。
　　7.Pearson相關(guān)性分析顯示，哮喘組血清MIF、Eotaxin-2、IgE及EOS％各指標(biāo)之間兩兩具有相關(guān)性，血清MIF與Eotaxin-2水平呈正相關(guān)（r=0.818，P＜0.01）;血清MIF與IgE水平呈正相關(guān)（r=0.778，P＜0.01）;血清Eotaxin-2與I

9、gE水平呈正相關(guān)（r=0.751，P＜0.01）。血清MIF、Eotaxin-2、IgE分別與EOS％呈正相關(guān)（r=0.532，P＜0.01;r=0.496，P＜0.01;r=0.444，P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　過敏性哮喘急性發(fā)作期患者血清MIF、Eotaxin-2、IgE和EOS％水平較健康對照組顯著增高，治療后較治療前顯著降低，MIF、Eotaxin-2、IgE與肺功能指標(biāo)呈負相關(guān)，且血清MIF、Eotaxin

10、-2、IgE和EOS％各指標(biāo)之間兩兩呈正相關(guān)，提示MIF、Eotaxin-2、IgE在過敏性哮喘的發(fā)病機制中起協(xié)同作用，并與疾病的嚴重程度相關(guān)，可作為臨床診療良好的監(jiān)測指標(biāo)，具有較好的臨床應(yīng)用價值。
　　第二部:分鈍化NF-κB的活化對過敏性哮喘大鼠肺組織MIF及血清IL-4表達的影響
　　方法:
　　按隨機數(shù)字表法將Wistar大鼠分為模型組、柳氮磺胺吡啶干預(yù)組（SASP組）、地塞米松干預(yù)組（DXM組）和對照組，根據(jù)

11、文獻報道的方法制備過敏性哮喘大鼠模型，并對各實驗組進行相應(yīng)處理或干預(yù)，實驗結(jié)束后以ELISA法檢測各組血清IL-4水平，對肺組織分別進行HE、PAS及免疫組化染色，觀察各組肺組織病理學(xué)變化，通過Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件對肺組織MIF、NF-κB蛋白的表達水平及支氣管黏膜杯狀細胞染色面積進行數(shù)據(jù)處理，并進行相應(yīng)指標(biāo)的對比研究和相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色比較:
　　模型組可見各級支氣管

12、周圍炎性細胞大量浸潤，支氣管黏膜上皮細胞水腫、脫落，管腔狹窄，多見粘液栓，支氣管平滑肌增生顯著，肺組織中炎性細胞浸潤明顯，肺泡間隔增寬;SASP組和DXM組各級支氣管周圍炎性細胞浸潤數(shù)量顯著減少，管腔狹窄及上皮細胞水腫減輕，可見少量粘液栓，支氣管平滑肌增生減輕，肺組織炎性細胞浸潤減少，肺泡間隔增寬減輕。對照組各級支氣管黏膜上皮完整，管腔無狹窄，肺組織未見顯著炎癥細胞浸潤，肺泡間隔正常，未見明顯平滑肌增生。
　　2.PAS染色比較:

13、
　　模型組可見各級小支氣管、細支氣管、終末細支氣管黏膜杯狀細胞大量增生，管腔可見大量粘液栓;SASP組和DXM組可見各級支氣管黏膜杯狀細胞少量增生，管腔可見少量粘液栓;對照組除氣管等大氣道以外，各級支氣管黏膜極少見到杯狀細胞。模型組、SASP組、DXM組杯狀細胞面積占支氣管黏膜上皮總面積的百分比(％)顯著高于對照組(P＜0.01); SASP組、DXM組杯狀細胞面積占支氣管黏膜上皮總面積的百分比(％)顯著低于模型組(P＜0.01

14、); SASP組和DXM組之間杯狀細胞面積占支氣管黏膜上皮總面積的百分比(％)無顯著性差異（P＞0.05）。
　　3.免疫組化染色比較:
　　(1)肺組織MIF蛋白表達:
　　模型組可見深棕色強陽性MIF蛋白表達，陽性區(qū)域主要位于支氣管黏膜、黏膜下層;SASP組和DXM組可見棕色陽性MIF蛋白表達，主要位于支氣管黏膜、黏膜下層;而對照組肺組織中支氣管黏膜、黏膜下層可見淺棕色弱陽性MIF蛋白表達。模型組、SASP組和DX

15、M組肺組織MIF的蛋白表達顯著高于對照組(P＜0.01); SASP組、DXM組肺組織MIF的蛋白表達顯著低于模型組（P＜0.01）;SASP組和DXM組之間MIF的蛋白表達無顯著性差異（P＞0.05）。
　　(2)肺組織NF-κB蛋白表達:
　　模型組可見深棕色強陽性NF-κB蛋白表達，陽性區(qū)域主要在各級支氣管黏膜、黏膜下層以及周圍血管的內(nèi)外膜;SASP組和DXM組可見棕色陽性NF-κB蛋白表達，主要位于支氣管黏膜、黏膜下

16、層以及周圍血管的內(nèi)外膜;對照組支氣管黏膜、黏膜下層可見淺棕色弱陽性NF-κB蛋白表達。模型組、SASP組和DXM組肺組織NF-κB的蛋白表達顯著高于對照組(P＜0.01);SASP組、DXM組肺組織NF-κB的蛋白表達顯著低于模型組(P＜0.01); SASP組和DXM組之間肺組織NF-κB的蛋白表達無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4.血清IL-4水平ELISA檢測結(jié)果比較:SASP組、DXM組和對照組的血清IL-4水平均顯著

17、低于模型組(P＜0.01);SASP組、DXM組和對照組之間血清IL-4水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.指標(biāo)相關(guān)性分析:
　　Pearson相關(guān)性分析顯示，哮喘大鼠肺組織MIF、NF-κB的表達與血清IL-4水平兩兩具有相關(guān)性，哮喘大鼠肺組織MIF與NF-κB表達呈正相關(guān)(r=0.883，P＜0.01)，哮喘大鼠肺組織MIF表達與血清IL-4水平呈正相關(guān)(r=0.707，P＜0.01)，哮喘大鼠肺組織NF-κ

18、B表達與血清IL-4水平呈正相關(guān)(r=0.712，P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　過敏性哮喘大鼠肺組織MIF、NF-κB和血清Th2型細胞因子IL-4存在過度表達，且各指標(biāo)之間兩兩呈正相關(guān)。采用NF-κB的特異性抑制劑柳氮磺胺吡啶或地塞米松鈍化NF-κB的活化，可顯著抑制肺組織MIF的表達，從而下調(diào)Th2型細胞因子IL-4的水平，進一步改善了肺部炎性細胞聚集、氣道狹窄、粘液高分泌及氣道重塑等肺部病理學(xué)改變，提示MIF作為過