滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢所致骨質(zhì)疏松大鼠OPG、RANKL表達的影響.pdf

1、從破骨細(xì)胞分化調(diào)控因子OPG、RANKL的角度，探討滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥的作用機理及其所存在的差異，進而為揭示中醫(yī)"腎主骨"的機理提供進一步的實驗依據(jù)。 方法 選用雌性Wistar大鼠66只，隨機分為3組：正常對照組10只、假手術(shù)組10只、造模型組46只。造模型組大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，在其麻醉狀態(tài)下摘除雙側(cè)卵巢，而假手術(shù)組只摘除卵巢附近的脂肪組織，但不摘除卵巢。在術(shù)

2、后2周，再將造模型組大鼠隨機分為4組：模型組11只、己烯雌酚組11只、滋補腎陰組12只、溫補腎陽組12只。然后，開始給大鼠灌胃給藥。己烯雌酚組灌胃給予己烯雌酚0.045mg/kg，給藥濃度為0.0045mg/ml；滋補腎陰組灌胃給予左歸丸9.52g生藥/kg，給藥濃度為0.952g生藥/ml；溫補腎陽組灌胃給予右歸丸11.96g生藥/kg，給藥濃度為1.196g生藥/ml。以上給藥體積均為1ml/100g。每天一次，連續(xù)6天，休息1天后

3、，再連續(xù)給藥6天，每周稱重一次，據(jù)此調(diào)整給藥量。如此給藥3個月。正常對照組、假手術(shù)組和模型組按同法灌服等體積的蒸餾水。各組大鼠于處死前16天和前3天分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg體重，以對骨進行熒光標(biāo)記。給藥結(jié)束后，將各組大鼠迅速處死。取右側(cè)脛骨制作不脫鈣骨切片，用于骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的測定；取左側(cè)脛骨制作脫鈣骨石蠟切片，用于免疫組織化學(xué)和核酸原位雜交染色，以觀察脛骨的OPG和RANKL的蛋白及mRNA的表達。 統(tǒng)計學(xué)處

4、理方法：實驗結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用單因素方差分析(ANOVA)進行數(shù)據(jù)處理，組間兩兩比較，采用q檢驗。 結(jié)果 1骨組織形態(tài)計量學(xué)檢測結(jié)果1.1滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨TBV％的影響模型組大鼠脛骨TBv％顯著低于假手術(shù)組。滋補腎陰組、溫補腎陽組、己烯雌酚組的TBV％均顯著高于模型組，但滋補腎陰組和溫補腎陽組明顯低于假手術(shù)組，而己烯雌酚組無顯著性變化。與己烯雌酚組比較，滋補腎陰組和溫補腎陽組T

5、BV％均明顯降低。與滋補腎陰組比較，溫補腎陽組的TBV％明顯增高。見表1。表1 各組大鼠脛骨TBV％的變化注：與假手術(shù)組比較：*P<0.05，** P<0.01；與模型組比較：△P<0．05，△△ P<0.01；與己烯雌酚組比較：▲P<0.05，▲▲P<0.01；與滋補腎陰組比較：☆P<0.05；下同。 1．2滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨TRS％的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脛骨TRS％顯著增高。滋補腎陰組和溫補腎陽

6、組的TRs％均顯著高于假手術(shù)組，但明顯低于模型組。己烯雌酚組的TRS％顯著低于模型組，而與假手術(shù)組相比，無顯著性差異。與己烯雌酚組比較，滋補腎陰組和溫補腎陽組的TRS％明顯增高。與滋補腎陰組比較，溫補腎陽組的TRS％明顯降低。 1．3滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨TFS％、AFS％和MAR的影響模型組大鼠脛骨TFS％、AFS％和MAR較假手術(shù)組皆顯著增高。與模型組相比，溫補腎陽組的TFS％、AFS％和MAR皆明顯降低，滋

7、補腎陰組的TFS％和MAR則明顯降低，但AFS％無顯著性變化；與假手術(shù)組相比，滋補腎陰組和溫補腎陽組的TFS％、AFS％和MAR均顯著增高。與模型組相比，己烯雌酚組的TFS％、AFS％和MAR皆顯著降低，而與假手術(shù)組相比，TFS％和MAR無顯著性差異。與己烯雌酚組相比，滋補腎陰組和溫補腎陽組的AFS％和MAR皆明顯增高。與滋補腎陰組比較，溫補腎陽組的TFS％和MAR皆明顯降低。 1．4滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨mA

8、R和OSW的影響模型組大鼠脛骨mAR和OSW顯著高于假手術(shù)組。溫補腎陽組和己烯雌酚組的mAR．和OSW均明顯低于模型組。滋補腎陰組和溫補腎陽組的mAR均明顯高于己烯雌酚組。與滋補腎陰組比較，溫補腎陽組的mAR和OSW無顯著性差異。 2滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨OB及MSC的OPG、RANKL蛋白和muRNA表達的影響 2．1滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨OB及MSC的OPG蛋白和mRNA表達的影響模型

9、組大鼠脛骨OB、MSC的OPG蛋白和mRNA表達陽性密度較假手術(shù)組皆顯著降低。滋補腎陰組和溫補腎陽組的OB、MSC的OPG蛋白和mRNA表達陽性密度顯著高于模型組；己烯雌酚組的OPG蛋白和mRNA表達的陽性密度與模型組相比顯著增高。 2．2滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢大鼠脛骨OB、MSC的RANKL蛋白和mRNA表達的影響模型組大鼠脛骨OB、MSC的RANKL蛋白和mRNA表達陽性密度較假手術(shù)組皆顯著增高。溫補腎陽組的陽性密度

10、明顯低于模型組；滋補腎陰組與模型組無顯著性差異。己烯雌酚組的RANKL蛋白和mRNA表達陽性密度顯著低于模型組，而與假手術(shù)組無顯著性差異。 各組大鼠脛骨Msc RANKL蛋白和mRNA表達陽性密度的變化假手術(shù)組與正常對照組比較，以上指標(biāo)均無顯著性差異，從而排除手術(shù)因素對實驗的影響。 結(jié)論 1．滋補腎陰法和溫補腎陽法對去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥均具有治療作用，但溫補腎陽法的效果要明顯優(yōu)于滋補腎陰法。 2．溫補