硫代反義寡核苷酸藥物癌泰得的臨床前研究.pdf

1、以hTERTmRNA為靶點(diǎn)的反義核酸抗腫瘤候選藥物癌泰得(序列為ACTCACTCAGGCCTCAGACT)在體內(nèi)、外水平表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性。作為新藥研發(fā)的候選化合物，其生產(chǎn)、體外活性評(píng)價(jià)和藥代動(dòng)力學(xué)研究是臨床前研究必不可少的環(huán)節(jié)。本課題在以往研究的基礎(chǔ)上，主要從事了以下三方面工作。 一、癌泰得生產(chǎn)和純化規(guī)模的放大以T-樹脂作為合成載體，采用DMT-ON形式在AKTAoligopilotⅡ合成儀上合成癌泰得，最大合成規(guī)?？蛇_(dá)2

2、mmol；純化時(shí)利用DMT的疏水性，在SOURCE15Q為填料的離子柱上預(yù)先用高鹽緩沖液洗脫不帶DMT基團(tuán)的合成失敗序列，接著用0.4％TFA在柱上切割，脫DMT保護(hù)后，使用鹽濃度梯度分離硫代不完全片斷和少量的(n-x)片斷，從而獲得純品。結(jié)果顯示，以290nm為監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)，流速為382cm/h，載量為12mg/g填料的條件下，純化產(chǎn)品終純度可達(dá)98.23％，各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)滿足藥用要求。 二、癌泰得體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)采用MTS還原法

3、評(píng)價(jià)了反義藥物癌泰得體外抗腫瘤活性。試驗(yàn)中選擇12株人源腫瘤細(xì)胞株，將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)24小時(shí)后用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染不同濃度的癌泰得于細(xì)胞中，用藥72小時(shí)后MTS試劑顯色并計(jì)算癌泰得對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率。以同一樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，采用Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50)。對(duì)各株腫瘤細(xì)胞重復(fù)試驗(yàn)一次。結(jié)果顯示，癌泰得對(duì)12株人腫瘤細(xì)胞在體外均有不同程度的增殖抑制作用，IC5

4、0值范圍為0.0464μmol/L～0.550μmol/L。 三、小鼠靜脈注射癌泰得后的組織分布研究建立了用于測(cè)定組織樣品中癌泰得的毛細(xì)管凝膠電泳法，并采用該法確定小鼠單次靜脈注射癌泰得后的組織分布特點(diǎn)。研究選用Balb/c種雄性小鼠，尾靜脈注射給藥50mg/kg。分別于用藥后0.25，0.5，1，2，3，4，8，24和48小時(shí)，放血、處死小鼠。收集每只小鼠的肝、腎、脾、肺、心、腦、肌肉、小腸和睪丸。選用長(zhǎng)度為24個(gè)堿基的寡核苷