反義寡核苷酸藥物癌泰得在獼猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、癌泰得（Cantide）為第一代反義寡核苷酸藥物，結(jié)構(gòu)為全硫代寡聚脫氧核糖核苷酸，包含20個(gè)堿基序列。它以端粒酶催化亞基hTERT mRNA 為靶點(diǎn)，根據(jù)堿基互補(bǔ)原理雜交后的雜合物阻斷了RNA 模板，封閉了hTERT的表達(dá)，從而抑制了端粒酶的活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡，具有抗腫瘤作用。
　　 本研究是Cantide 臨床前研究的一部分，考察了Cantide 在獼猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性，以便為今后的臨床試驗(yàn)提供參考。研究比較了獼猴單次

2、vd 不同劑量（8，16，24 mg·kg-1）Cantide 后血漿中原形藥物濃度-時(shí)間變化和藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)；并研究了每天vd 8 mg·kg-1 Cantide 1 次，連續(xù)7 天后血漿中原形藥物濃度-時(shí)間變化和藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。并同時(shí)對(duì)單次及多次給藥后血漿中Cantide 代謝產(chǎn)物（n-1）和（n-2）的藥物濃度-時(shí)間變化和藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步觀察和比較。
　　 1.獼猴血漿中Cantide 定量分析方法的優(yōu)化和確證

3、r>　　 采用兩步固相萃取（SPE）法并結(jié)合非膠篩分毛細(xì)管電泳（NGCE）技術(shù)建立了獼猴血漿中反義寡核苷酸藥物Cantide的定量分析方法。通過對(duì)方法進(jìn)行考察和優(yōu)化，并最終確定了固相萃取的相關(guān)條件（陰離子交換柱上樣緩沖液pH值為9.0，上樣體積及洗脫體積分別為5mL和3 mL）和NGCE的分析條件（灌膠時(shí)間為30min，分離電壓為24 kV）。在此條件下，獼猴血漿中Cantide 在1.95～250 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)

4、系，最低定量限（LLOQ）為1.95μg·mL-1，標(biāo)準(zhǔn)曲線和QC樣品中最低濃度點(diǎn)和其余各濃度點(diǎn)的偏差均<15％。批內(nèi)準(zhǔn)確度為93.38％～100.71％，批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（intra-day RSD）<10.66％；批間準(zhǔn)確度為89.46％～103.46％，批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（inter-day RSD）<8.60％。在不同條件下（室溫4 h，4℃存放24 h，反復(fù)凍融2 次，-80 ℃保存1個(gè)月和-80 ℃保存7個(gè)月）Cantide

5、在獼猴血漿中穩(wěn)定性良好。
　　 方法學(xué)確證結(jié)果表明，該方法的特異性、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性均符合藥代動(dòng)力學(xué)研究要求，可以用于Cantide 在獼猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究中。
　　 2.獼猴單次vd 不同劑量Cantide 后原形及其代謝產(chǎn)物（n-1）和（n-2）的血漿藥物濃度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)
　　 獼猴單次vd 8、16和24 mg·kg-1 Cantide 后血漿原形藥物濃度達(dá)峰時(shí)間（Tmax）多在滴注結(jié)

6、束的即時(shí)，分別為32.50±2.89，32.50±2.89，28.75±6.29 min。低、中、高劑量組峰濃度（Cmax）分別為72.21±8.68（與中劑量組相比P<0.001），110.90±11.22（與高劑量組相比P<0.05）和150.01±17.84 μg·mL-1（與低劑量組相比P<0.01），不同給藥劑量組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別。
　　 末端消除相半衰期t1/2 分別為57.91±23.64 （與中劑量組相比無統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義的差別），73.58±25.45（與高劑量組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別）和77.94±8.84 min（與低劑量組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別）。低、中、高劑量組AUC(0-t)分別為4874.46±844.08（與中劑量組相比P<0.05），6998.54±1094.18（與高劑量組相比P<0.05），11057.38±2068.03 μg·min·mL-1（與低劑量組相比P<0.01）。低、中、高劑量組AUC(0-inf)分別為514

8、8.73±1018.81（與中劑量組相比P<0.05），7392.22±1019.76（與高劑量組相比P=0.0571），12462.22±3485.74 μg·min·mL-1（與低劑量組相比P<0.05）。各劑量組給藥劑量之比為1：2：3，AUC(0-inf)的增長(zhǎng)比為1：1.43：2.42。
　　 低、中、高劑量組血漿清除率CLs 分別為1.60±0.31（與中劑量組相比P<0.05），2.19±0.27（與高劑量組相比無

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別），2.04±0.53 mL·min-1·kg-1（與低劑量組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別）。
　　 各劑量組給藥后代謝產(chǎn)物（n-1）和（n-2）的血漿藥物濃度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)組間比較結(jié)果和原形藥物類似，同一時(shí)間點(diǎn)樣品中代謝產(chǎn)物的濃度均低于原形藥物，血漿中代謝產(chǎn)物緊隨原形藥物之后達(dá)到峰濃度，短鏈代謝產(chǎn)物的清除率高于長(zhǎng)鏈的原形藥物，獼猴體內(nèi)的原形藥物不斷轉(zhuǎn)化成代謝產(chǎn)物，鏈縮短的代謝產(chǎn)物的MRT 較原形藥物延長(zhǎng)，末端消除相

10、半衰期增大，高劑量組表現(xiàn)尤為明顯。
　　 3.獼猴多次vd 8 mg·kg-1 Cantide 后原形及其代謝產(chǎn)物（n-1）和（n-2）的血漿藥物濃度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)
　　 獼猴多次vd 8 mg·kg-1 Cantide 后末次給藥血漿原形藥物濃度達(dá)峰時(shí)間（Tmax）為35.00±7.07 min；峰濃度Cmax 為58.34±17.39 μg·mL-1；末端相半衰期t1/2 為57.45±24.38 min，血漿清除

11、率CLs 為1.85±0.14 mL·min-1·kg-1；AUC(0-t)為4010.71±223.81 min·μg·mL-1，AUC(0-inf)為4335.55±306.16 μg·min·mL-1，以上參數(shù)與首次給藥組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差別。首末次給藥后其代謝產(chǎn)物（n-1）和（n-2）的血漿藥物濃度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別，提示多次給藥后Cantide 在獼猴體內(nèi)的代謝過程沒有明顯改變，藥物的代謝和清除過程一致，