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文檔簡介
1、1、在血清血水平利用毛細管電泳技術(shù)建立一種自動化、高通量,精確的地中海貧血診斷方法,對等電聚焦毛細管電泳(capillaryisoelectric focusing,CIEF)檢測血紅蛋白A<,2>(Hb A<,2>)含量做出用于篩查地中海貧血(地貧)攜帶者的方法學評價.2、建立一種快速、操作簡單、自動化的基于變性高效液相色譜技術(shù)并結(jié)合引物延伸技術(shù)(primer extension-denaturing high performance
2、liquid chromatography(PE-DHPLC))的針對中國人群最常見的5種β-地中海貧血(β-地貧)基因型的基因診斷新方法.方法1、收集105名健康成人、93例經(jīng)常規(guī)地貧篩查有陽性表型的連續(xù)臨床樣品.通過正常人樣品分析比較CIEF測定HbA<.2>與HelenaSpife combo電泳系統(tǒng)結(jié)果的一致性;通過比較樣品內(nèi)和樣品間HbA<,2>的CIEF測定值的變異系數(shù)(CVs)評價該法的精確度和穩(wěn)定性;通過分析陽性樣品的基
3、因型來評價CIEF檢測地貧的準確性.2、依據(jù)人類β珠蛋白基因序列設(shè)計可擴增包含目前已知中國人群所有β-地貧突變位點的引物.同時,根據(jù)中國人群中5個最常見的β-地貧突變位點[CDs41-42(-TCTT),IVS-2-654(C>T),TATAbox-28(A>G),CD17(A>T)和CDs71-72(+A)]的位置及變性高效液相色譜在全變性條件下的分離特點設(shè)計5條延伸引物.利用PCR擴增得到檢測靶序列片段,然后以純化的靶序列片段為模板
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