十種中藥植物雌激素樣作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、雌激素(estrogen)是女性體內(nèi)關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)激素，不僅對(duì)女性生殖系統(tǒng)的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化有重要的調(diào)控作用，而且對(duì)骨骼系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能也有重要影響。女性進(jìn)入絕經(jīng)期后，隨著卵巢功能的衰退和體內(nèi)雌激素水平的下降，女性將出現(xiàn)更年期綜合征，骨質(zhì)疏松、心血管疾病、老年性癡呆等疾病的發(fā)病率也隨之上升；而雌激素替代療法(estrogen replacement therapy,ERT)雖然可明顯緩解上述更年期癥狀，但長(zhǎng)期應(yīng)用雌

2、激素易產(chǎn)生高血凝狀態(tài)、高血壓、水腫、癡呆等副作用，并增加乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤的發(fā)病危險(xiǎn)。因此，人們一直致力于尋求雌激素替代物，期望這種替代物既能發(fā)揮雌激素對(duì)心腦血管等系統(tǒng)的保護(hù)作用，緩解更年期綜合癥；同時(shí)又能避免上述副作用，植物雌激素(phytoestrogen)正是其中的重要一類。 植物雌激素是天然存在于一些植物中、具有雌激素效能的化合物。因與雌激素結(jié)構(gòu)類似，這些化合物可以與體內(nèi)雌激素受體(estrogen recep

3、tor,ER)結(jié)合并顯示雌激素樣活性。植物雌激素在體內(nèi)具有雙向調(diào)節(jié)作用：在體內(nèi)雌激素水平較低時(shí)有擬雌激素作用；當(dāng)體內(nèi)雌激素水平較高時(shí)可發(fā)揮抗雌激素活性。因此，近年來(lái)植物雌激素又被稱為“選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑”(selective estrogen receptor modulators，SERMs)。 長(zhǎng)期以來(lái)，許多中草藥植物被廣泛應(yīng)用于婦女保健和婦科病癥的治療，這些中藥所含的植物雌激素在其中發(fā)揮的藥效作用不容忽視。在含有植物雌

4、激素成分的中藥中，活血化瘀類和補(bǔ)益類中藥居各類中藥的前二位。本研究選取了其中的十種中藥及其所含的部分活性成分作為研究對(duì)象，利用整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、體外細(xì)胞培養(yǎng)并結(jié)合報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)觀察比較了它們的植物雌激素樣作用，探討了其可能的作用機(jī)制及其影響因素；為婦科臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為更年期婦女保健提供理論依據(jù)。 1、利用小鼠子宮增重法對(duì)十種婦科常用中藥(川牛膝、紅花、丹參、女貞子、枸杞、甘草、肉蓯蓉、淫羊藿、補(bǔ)骨脂和菟絲子)進(jìn)行雌激素樣作

5、用的篩選 通過(guò)觀察用藥前后小鼠子宮系數(shù)和體重變化情況，評(píng)價(jià)淫羊藿等十種中藥的雌激素樣作用；并利用Elisa法測(cè)定血清E<,2>、FSH、LH水平的變化，免疫組化法檢測(cè)小鼠子宮組織ERα和ERβ的表達(dá)情況。 2、MCF7細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)紅花等十種中藥的植物雌激素活性 利用ER陽(yáng)性MCF7細(xì)胞，單獨(dú)灌胃中藥免煎劑或同時(shí)灌胃己烯雌酚和中藥免煎劑，以MTT法檢測(cè)紅花、川牛膝、丹參、女貞子、枸杞、甘草、肉蓯蓉、淫羊藿、補(bǔ)骨

6、脂、菟絲子等十味中藥含藥血清對(duì)細(xì)胞增殖的影響；評(píng)價(jià)十味中藥的植物雌激素活性。結(jié)果：紅花、川牛膝、丹參、枸杞、肉蓯蓉、淫羊藿、補(bǔ)骨脂和菟絲子等中藥含藥血清可顯著促進(jìn)MCF7細(xì)胞增殖；而女貞子組可見(jiàn)細(xì)胞增殖受到明顯抑制。在拮抗實(shí)驗(yàn)中，紅花、川牛膝、丹參、甘草、淫羊藿、補(bǔ)骨脂和菟絲子組可見(jiàn)己烯雌酚促細(xì)胞增殖的作用受到了顯著抑制；而肉蓯蓉可協(xié)同并顯著增強(qiáng)己烯雌酚促細(xì)胞增殖的作用。 3、補(bǔ)骨脂等五種中藥植物雌激素活性的實(shí)驗(yàn)研究 利

7、用大鼠子宮增重實(shí)驗(yàn)及檢測(cè)含藥血清影響ER陽(yáng)性MCF7細(xì)胞增殖的方法評(píng)價(jià)五種中藥的植物雌激素活性。 4、四種中藥和六種中藥活性成分植物雌激素作用的比較研究 采用MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察四種中藥：川牛膝、紅花、丹參、補(bǔ)骨脂及其所含六種活性成分：蛻皮甾酮、紅花黃色素A、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞MCF7增殖的影響，并以雌激素受體拮抗劑ICl182,780干預(yù)，探討其發(fā)揮雌激素樣作用的可能機(jī)制。

8、 5、異補(bǔ)骨脂素和蛻皮甾酮對(duì)人乳腺癌T47D細(xì)胞增殖及ER亞型、pS2、PR表達(dá)的影響利用人乳腺癌T47D細(xì)胞觀察異補(bǔ)骨脂素和蛻皮甾酮對(duì)雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞T47D增殖的作用，并檢測(cè)其對(duì)T47D細(xì)胞雌激素受體亞型ER-α、ER-β和雌激素效應(yīng)基因pS2及PR表達(dá)的影響。 6、補(bǔ)骨脂素的植物雌激素作用及其機(jī)制的探討 利用人乳腺癌T47D細(xì)胞觀察補(bǔ)骨脂素的雌激素樣作用，并探討其可能的作用機(jī)制。具體方法為：利用MTT細(xì)胞

9、增殖實(shí)驗(yàn)觀察補(bǔ)骨脂素對(duì)ERα、ERβ陽(yáng)性細(xì)胞T47D增殖的影響：以半定量RT-PCR法檢測(cè)其對(duì)該細(xì)胞雌激素效應(yīng)基因：孕激素受體(PR)mRNA表達(dá)情況的影響。同時(shí)，以雌激素受體拮抗劑IC1182，780為工具藥進(jìn)行干預(yù)；并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞ERα、ERβ、PR含量的變化。 7、基于報(bào)告基因方法對(duì)中藥活性成分植物雌激素作用的比較研究 通過(guò)重組熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)比較研究蛻皮甾酮、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的植物雌激素作用及其

10、可能機(jī)制。 結(jié)論: l、整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的十種中藥均具有一定的植物雌激素活性或搞雌激素活性；但其作用靶器官、作用強(qiáng)度和途徑有所差異。 2、對(duì)藥物血清的雌激素活性進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)：紅花、川牛膝、丹參、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、菟絲子等六種中藥在單獨(dú)用藥時(shí)均表現(xiàn)出擬雌激素作用，在與雌激素同時(shí)用藥時(shí)表現(xiàn)抗雌激素作用；其雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)依賴于體內(nèi)雌激素水平的高低。 3、中藥川牛膝、紅花、補(bǔ)骨脂、丹參及其活性成分：蛻

11、皮甾酮、紅花黃色素A、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素能夠促進(jìn)ER(+)MCF7細(xì)胞增殖，而丹參的兩種活性成分：丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA可抑制MCF7細(xì)胞增殖，其作用均是通過(guò)ER介導(dǎo)的。 4、異補(bǔ)骨脂素和蛻皮甾酮可促進(jìn)ER(+)T47D細(xì)胞增殖，并可影響靶細(xì)胞ER亞型、pS2的mRNA表達(dá)水平和ER亞型、PR蛋白的表達(dá)；異補(bǔ)骨脂素和蛻皮甾酮具有植物雌激素作用。 5、補(bǔ)骨脂素可促進(jìn)ER(+)T47D細(xì)胞增殖，增強(qiáng)ER亞型和PR的表達(dá)，且其