雌激素對小鼠肝臟羧酸酯酶的作用及其機制.pdf

1、藥物進入人體后會被當作異物進行清除。人體主要是肝臟通過藥物代謝酶對藥物進行代謝。參與代謝的藥物代謝酶可以分為Ⅰ相藥物代謝酶和Ⅱ相藥物代謝酶。Ⅰ相藥物代謝酶包括細胞色素450(cytochrome P450)酶系、羧酸酯酶等。Ⅱ相藥物代謝酶包括硫轉移酶(sulfotransferase.SULT)、谷胱甘肽轉移酶(glutathione S-transferase, GST)等。
　　很多因素影響藥物代謝酶的表達和活性。這些因素包括

2、生理因素、環(huán)境因素、飲食、疾病與藥物等。生理因素包括性別、年齡、種族與個體差異。多種人體和動物模型的實驗結果表明性別是影響藥物代謝酶表達和活性的一個重要因素。
　　懷孕婦女和絕經后的婦女體內藥物代謝與正常非絕經婦女及男性不同。孕婦或絕經后婦女在使用某些藥物時，如果用相同劑量有可能會導致藥物對疾病的治療失敗或產生毒性反應，這些主要是由于婦女在妊娠期、絕經后體內的雌激素水平發(fā)生改變。
　　雌激素是人體內的一種重要的性激素。女性體

3、內的雌激素主要由卵巢產生。在人體內天然的雌激素包括雌酮、雌二醇、雌三醇。其中，雌二醇的生物活性最強。游離的雌激素分泌入血后擴散到靶組織，與靶組織細胞上的核受體或膜性受體結合后激活信號轉導通路而發(fā)揮作用。雌激素主要通過四種途徑對下游靶基因發(fā)揮作用:1、經典的配體依賴型轉導通路;2、非配體依賴型轉導通路;3、非ERE依賴型轉導通路;4、通過細胞膜轉導（非基因組）的信號通路。研究表明17β-雌二醇（17β-estradiol，E2）能夠改變某

4、些細胞色素450酶系的表達和活性。婦女妊娠期間，E2水平比正常婦女和男性的E2水平高100倍，婦女絕經后血中的E2濃度減少80％-90％。E2有可能通過影響某些藥物代謝酶的表達來影響許多藥物的代謝。這些藥物代謝的變化進而影響孕婦和絕經后婦女用藥后的血藥濃度，進而影響藥物療效或造成毒性反應。
　　羧酸酯酶(Carboxylesterases，CES)屬于Ⅰ相藥物代謝酶，它存在于大多數哺乳動物的肝、腸、腎等微粒體中。能夠水解羧酸酯類、

5、氨甲酸脂類、酰胺類、硫酯類物質。羧酸酯酶包括兩型:羧酸酯酶1（Carboxylesterase1，人類為CES1，小鼠為Ces1d）、羧酸酯酶2（Carboxylesterase2，人類為CES2，小鼠為Ces1e），CES1(Ces1d)與CES2(Ces1e)結構不同，主要水解的藥物也不同。CES1(Ces1d)能夠水解一些ACEI類抗高血壓藥物、氯吡格雷等。這些藥物作為前藥進入人體需經過CES1(Ces1d)的水解才能發(fā)揮作用。高

6、血壓和妊娠期高血壓是婦女絕經后和妊娠期常見的一種疾病。高血壓是造成老年婦女心血管事件的主要因素、妊娠高血壓是孕產婦及圍生兒死亡的主要原因。CES2(Ces1e)主要代謝一些抗腫瘤藥物伊立替康等。E2對羧酸酯酶表達的影響對于女性絕經后、妊娠期婦女合理用藥有重要的意義。
　　目的:在體和離體水平，研究雌激素對小鼠肝臟羧酸酯酶的作用及其機制。
　　方法:取三十只雌性ICR小鼠隨機分為三組，第一組為假手術組（SHAM），第二組為卵巢

7、切除組(OVX)，第三組為卵巢切除后給予雌激素組(OVX+E2)。處死后取肝臟組織，測量Ces1d、Ces1e的mRNA水平、蛋白質水平及酶的水解活性的變化。離體培養(yǎng)小鼠肝原代細胞，給予不同濃度E2、在不同時間點測出Ces1d、Ces1e的表達及酶的水解活性的變化。再給予轉錄抑制劑ActD、AP-1通路抑制劑SP600125探討E2抑制Ces1d、Ces1e的機制。
　　結果:1、在體實驗中，OVX組小鼠肝臟的Ces1d、Ces1

8、e的mRNA水平、蛋白質水平和肝臟組織中酶的水解活性明顯增高。而OVX+E2組小鼠的肝臟Ces1d、Ces1e的mRNA、蛋白質水平和肝臟組織中酶的水解活性較模型組(OVX)明顯降低，而接近正常對照組。提示E2對小鼠肝臟羧酸酯酶有抑制作用。2、在離體原代培養(yǎng)小鼠肝細胞中，E2能抑制Ces1d、Ces1e的表達及活性。3、給予轉錄抑制劑放線菌素D(Actinomycin D，ActD)后再給予E2后則能消除E2對Ces1d、Ces1e的m