雌激素增強(qiáng)Urocortin舒血管作用的機(jī)制.pdf

1、絕經(jīng)后女性心血管疾病發(fā)病率較絕經(jīng)前明顯增加，研究表明這種變化與女性絕經(jīng)后體內(nèi)雌激素水平下降顯著相關(guān)。女性絕經(jīng)后血管功能的變化主要是舒張功能的減弱。已有研究表明雌激素具有促進(jìn)血管舒張的作用，但其中的機(jī)制并未完全闡明。
　　 Urocortins (Ucns)是促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone, CRH)的相關(guān)肽，在血管系統(tǒng)中主要與CRHR2 結(jié)合發(fā)揮舒血管作用。有研究報(bào)道，C

2、RH誘導(dǎo)皮膚血管舒張的作用具有顯著的性別差異：首先對女性的效應(yīng)明顯強(qiáng)于男性；而這種舒血管效應(yīng)的強(qiáng)弱也與女性月經(jīng)周期雌激素的水平顯著相關(guān)。提示雌激素可能參與了CRHR2 介導(dǎo)的舒血管作用。故本課題主要研究雌激素能否調(diào)節(jié)血管系統(tǒng)中Ucns及CRHR2的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)CRHR2 介導(dǎo)的舒血管作用及其機(jī)制。
　　 主要研究內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 一、去卵巢和雌激素替代對大鼠胸主動脈血管環(huán)收縮和舒張功能的影響：將雌性SD大鼠隨

3、機(jī)分為三組：對照組(Sham)，去卵巢組(Ovx)和去卵巢+雌激素替代組(Ovx+E2)。Ovx+E2組給予雌二醇30μg/kg 皮下注射，其余兩組給予溶劑，12周后取胸主動脈制成血管環(huán)，采用離體血管功能檢測系統(tǒng)觀察苯腎上腺素(phenylephrine, PE)及Urocortin分別對假手術(shù)、去卵巢以及去卵巢后雌激素替代治療三組大鼠血管環(huán)引起的收縮和舒張功能的變化。發(fā)現(xiàn)去卵巢和雌激素替代對PE 誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈血管環(huán)的收縮功能并無

4、顯著影響；但去卵巢后，Ucn 誘導(dǎo)的血管環(huán)舒張作用明顯降低，IC50值顯著升高；雌激素替代后，Ucn的舒張效應(yīng)及其IC50值均恢復(fù)至假手術(shù)水平。由此說明雌激素替代可以有效促進(jìn)Ucn 誘導(dǎo)的去卵巢大鼠胸主動脈血管環(huán)的舒張作用。
　　 二、去卵巢和雌激素替代對大鼠胸主動脈Ucns和CRHR2表達(dá)的影響：采用Real-Time PCR 方法檢測大鼠胸主動脈中Ucns和CRHR2 mRNA的表達(dá)；Western Blot 檢測CRHR2

5、蛋白表達(dá)；用放射免疫法(RIA)檢測Ucns 多肽的含量。發(fā)現(xiàn)去卵巢和雌激素替代后，血管組織中三種Ucns mRNA表達(dá)和多肽含量不變；但去卵巢后，CRHR2表達(dá)顯著降低，而雌激素替代能明顯促進(jìn)去卵巢大鼠胸主動脈CRHR2的表達(dá)。
　　 三、雌激素對原代分離培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞Ucns和CRHR2表達(dá)的調(diào)節(jié)作用：在原代分離培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞中加入雌激素(10-11～10-7mol/L)，發(fā)現(xiàn)雌激素對平滑肌細(xì)胞U

6、cns mRNA的表達(dá)、細(xì)胞裂解液和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中Ucns 多肽的含量均無明顯調(diào)節(jié)作用，但可以劑量依賴性地促進(jìn)平滑肌細(xì)胞CRHR2 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 此外，Ucn(10-10～10-8mol/L)對CRHR2的mRNA和蛋白表達(dá)有劑量依賴性的下調(diào)作用，雌激素(10-7mol/L)可以有效逆轉(zhuǎn)Ucn對CRHR2表達(dá)的下調(diào)。這一作用可以被雌激素受體(estrogen receptor，ER)非特異性阻斷劑ICI182,

7、780或Erβ特異性阻斷劑THC (Tereahydro-Chrysenediol) 完全阻斷；而Erα特異性阻斷劑MPP(Methyl-Phenol-Pyrazole)對雌激素上調(diào)CRHR2表達(dá)的作用無顯著影響。提示雌激素可能主要通過Erβ促進(jìn)CRHR2的表達(dá)。
　　 四、雌激素增強(qiáng)Ucn促進(jìn)血管平滑肌舒張的機(jī)制：在原代大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞中加入U(xiǎn)cn，發(fā)現(xiàn)Ucn(10-10～10-8mol/L)可以劑量依賴性地增加平滑肌細(xì)

8、胞中cAMP 含量。同時(shí)Ucn 可以劑量依賴性地抑制磷脂酶Cβ亞型的同工酶3(phospholipase C β3 subtype, PLC-β3)蛋白磷酸化，并減少細(xì)胞內(nèi)三磷酸肌醇(inositol triphosphate, IP3)的含量；PE(10-9～10-6mol/L)可以使PLC-β3蛋白磷酸化水平及IP3的生成增加，而10-8mol/L Ucn對PE 增加PLC-β3蛋白磷酸化和PI3 生成的效應(yīng)具有顯著逆轉(zhuǎn)作用。加入腺

9、苷酸環(huán)化酶(adenylate cyclase, AC)抑制劑SQ22536及cAMP 依賴的蛋白激酶(PKA)抑制劑H89 均可阻斷Ucn 抑制PLC-β3蛋白磷酸化和IP3 生成的作用。上述結(jié)果表明Ucn對PE預(yù)收縮的血管環(huán)的舒張效應(yīng)是通過對PLC-β3蛋白磷酸化及隨后IP3 生成的抑制實(shí)現(xiàn)的；而Ucn 抑制PLC-β3蛋白磷酸化和 IP3 生成則可能是通過其激活A(yù)C 生成cAMP 并繼而激活PKA 實(shí)現(xiàn)的，這可能是Ucn 介導(dǎo)血管