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文檔簡介
1、環(huán)境雌激素又稱環(huán)境內分泌干擾物質(EDs),是指一類存在環(huán)境中能干擾人或動物體內分泌系統(tǒng)并導致異常效應的物質。環(huán)境雌激素對人類生存環(huán)境的損害正在日益成為人類面臨的一個嚴峻問題。環(huán)境雌激素能夠影響自然界生物包括人類的健康,導致各種疾病,它的影響是多方面的,其中對雄性生殖系統(tǒng)機能的危害最引人注目。大量動物實驗證明,EDs能夠影響雄性生殖系統(tǒng)的發(fā)育和功能,但其作用機制非常復雜,尤其在分子機制方面目前不甚了解,另外環(huán)境雌激素存在較多種類,它們之
2、間還具有協(xié)同作用,單獨檢測某一種環(huán)境雌激素活性可能會低估其潛在的危害性,這樣就更增加了其危害作用及機理的復雜性,因此有必要對一些常見的環(huán)境雌激素進行混合性效應研究。本實驗采用組合酶消化、選擇性貼壁的方法,分離得到了高純度的小鼠睪丸支持細胞;在DMEM培養(yǎng)基中添加不同濃度(10-9,10-7,10-5mol/L)的雙酚A(BPA)、大豆異黃酮、BPA與大豆異黃酮的共同處理以及這兩種環(huán)境雌激素分別與睪酮的混合,作用體外培養(yǎng)的小鼠睪丸支持細胞
3、,然后用激光共聚焦顯微鏡檢測細胞色素C(Cytochromec,cytC)和Bcl-2家族蛋白中Bax、Bcl-2的表達變化。實驗結果顯示: 1.應用組合酶消化、選擇性貼壁的方法,分離得到的小鼠睪丸支持細胞的純度達到90%以上。 2.激光共聚焦顯微鏡檢測結果顯示:低濃度(10-9mol/L)的BPA或大豆異黃酮單獨處理組與對照組相比,細胞色素C的信號較強,Bcl-2家族蛋白中Bax的信號較弱、Bcl-2的信號較強;隨
4、著BPA或大豆異黃酮處理組劑量的升高(10-7,10-5mol/L),細胞色素C的信號逐漸降低,Bcl-2家族蛋白中Bax的信號逐漸增強、Bcl-2的信號逐漸降低,說明低濃度的BPA或大豆異黃酮對小鼠睪丸支持細胞可能具有促進增殖的作用,高濃度可能促進細胞凋亡。 3.與BPA或大豆異黃酮(10-9mol/L)單獨處理組相比,BPA與大豆異黃酮低濃度共同處理(10-9mol/L)小鼠睪丸支持細胞后,細胞色素C的信號較弱,Bcl-2
5、家族蛋白中Bax的信號較強、Bcl-2的信號較弱;而高劑量的共同處理組(10-5mol/L)與BPA、大豆異黃酮(10-5mol/L)單獨處理組相比,細胞色素C的信號明顯增強,Bcl-2家族蛋白中Bax的信號強度明顯減弱、Bcl-2的信號明顯增強,說明低劑量的BPA與大豆異黃酮混合可能出現(xiàn)毒性疊加反應,而在高劑量時可能發(fā)生拮抗現(xiàn)象。 4.BPA、大豆異黃酮分別與睪酮共同處理(10-5mol/L)與BPA、大豆異黃酮(10-5m
6、ol/L)單獨處理組相比,細胞色素C的信號明顯增強,Bcl-2家族蛋白中Bax的信號明顯減弱、Bcl-2的信號明顯增強,說明這兩種環(huán)境雌激素與睪酮出現(xiàn)明顯的拮抗現(xiàn)象。 研究表明:BPA或大豆異黃酮單獨作用體外培養(yǎng)的小鼠睪丸支持細胞時,其作用機制可能相同;BPA與大豆異黃酮共同處理小鼠睪丸支持細胞,在低劑量時可能具有疊加作用,而在高劑量時則具有相互拮抗的效應;EDs還可以通過拮抗雄激素發(fā)揮作用。這些激素對睪丸支持細胞的影響可能主
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