雌激素對髓鞘再生的影響及機制研究.pdf

1、目的:評價雌激素對髓鞘再生的影響并探討其可能的機制，為脫髓鞘疾病損傷的治療提供新的思路。
　　方法:66只雌性6周齡C57 BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機分為6組(n=11):正常組、脫髓鞘模型組、自然恢復組（脫髓鞘后自然恢復2周）、雌激素治療組（脫髓鞘后雌二醇E2（5mg/kg體重，治療2周）、卵巢去勢組（脫髓鞘后卵巢去勢，2周后觀察）和假手術(shù)組（脫髓鞘后假手術(shù)，2周后觀察）。小鼠脫髓鞘模型以0.2％ Cuprizone(C

2、PZ)混合飼料連續(xù)飼喂6周方式誘導。通過免疫組織化學染色方法檢測小鼠腦組織內(nèi)髓鞘堿性蛋白MBP(Myelin basic protein)的表達，評價髓鞘脫失及再生的程度;以行為學實驗方法檢測激素治療對小鼠運動能力的影響;以westernblot技術(shù)及免疫組化實驗方法檢測小鼠腦組織內(nèi)MBP、少突膠質(zhì)細胞前期細胞標記物NG2(nerve glial antigen2)、少突膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)錄因子2Olig2(oligodendrocyte tr

3、anscription factor2)、星形膠質(zhì)細胞標記物GFAP(glialfibrillary acidic protein)的表達情況，旨在探討雌激素對髓鞘再生的影響及其可能的機制。
　　結(jié)果:
　　1動物模型制作
　　免疫組織化學檢測顯示，正常組小鼠胼胝體區(qū)MBP染色深，結(jié)構(gòu)均勻致密(平均光密度值為0.18±0.05)，而脫髓鞘模型組(平均光密度值為0.08±0.04) MBP染色較淺，結(jié)構(gòu)松散、稀疏，塊狀不

4、均勻，表達較正常組顯著降低（P＜0.05），證實脫髓鞘模型建立成功。脫髓鞘小鼠卵巢去勢后經(jīng)連續(xù)陰道涂片(連續(xù)5天)HE染色，鏡下可見大量白細胞，無角化的上皮細胞，即小鼠處于發(fā)情間期，證實卵巢去勢模型建立成功。
　　2體重變化
　　正常組小鼠體重逐漸緩慢增長，CPZ誘導小鼠脫髓鞘過程中前2周小鼠體重急劇下降，之后緩慢增長，但體重始終低于同齡正常組;停止CPZ飼喂后給予E2治療組小鼠體重比自然恢復組小鼠及卵巢去勢組小鼠體重明顯增

5、加(P＜0.05)。
　　3運動能力檢測
　　在旋轉(zhuǎn)棒實驗中，脫髓鞘模型組小鼠在旋轉(zhuǎn)棒上的維持時間明顯短于正常組小鼠（P＜0.05）;自然恢復組較脫髓鞘模型組在棒上的時間延長（P＜0.05）;給予雌激素治療后小鼠在棒上的維持時間較自然恢復組小鼠延長（P＜0.05）;卵巢去勢組小鼠在棒上的維持時間與自然恢復組相比未見顯著差異（P＞0.05），假手術(shù)組小鼠在棒上的維持時間與自然恢復組相比未見顯著差異（P＞0.05）。
　　

6、4免疫組化結(jié)果
　　正常組、脫髓鞘模型組、自然恢復組及卵巢去勢組在小鼠胼胝體區(qū)均僅可見NG2陽性細胞（在胞漿表達），即少突膠質(zhì)細胞前體細胞。脫髓鞘模型組NG2陽性細胞數(shù)較正常組增多（P＜0.05）;自然恢復組與脫髓鞘模型組NG2陽性細胞數(shù)組間未見明顯差異(P＞0.05);雌激素治療組NG2陽性細胞數(shù)量較自然恢復組明顯增多（P＜0.05），提示給予雌激素治療后少突膠質(zhì)細胞前體細胞增殖;卵巢去勢組與自然恢復組之間未見明顯差異（P＞0.

7、05），假手術(shù)組與自然恢復組之間未見明顯差異（P＞0.05）。
　　正常組小鼠腦胼胝體區(qū)可見少量Olig2、GFAP陽性細胞（在胞漿表達），脫髓鞘模型組Olig2、GFAP陽性細胞數(shù)較正常組顯著增多（P＜0.05），自然恢復組及卵巢去勢組Olig2、GFAP陽性細胞較脫髓鞘組減少（P＜0.05），但仍比正常組多，給予雌激素治療2周后Olig2、GFAP陽性細胞數(shù)較脫髓鞘顯著減少(P＜0.05)，已接近正常組陽性細胞數(shù)量;假手術(shù)組與

8、自然恢復組之間未見明顯差異（P＞0.05）。
　　5 western blot檢測結(jié)果
　　正常組、脫髓鞘模型組、自然恢復組及卵巢去勢組均有NG2少量表達;脫髓鞘模型組較正常組NG2表達增多（P＜0.05）;自然恢復組NG2與脫髓鞘模型組比較未見明顯差異（P＞0.05）;雌激素治療組NG2表達較自然恢復組明顯增多（P＜0.05）;卵巢去勢組NG2表達低于自然恢復組（P＜0.05）。
　　正常組小鼠腦組織Olig2、GF

9、AP有少量表達，脫髓鞘模型組Olig2、GFAP表達較正常組顯著增多(P＜0.05），給予雌激素治療后，Olig2、GFAP表達明顯下降(P＜0.05)。自然恢復組及卵巢去勢組Olig2、GFAP表達也較脫髓鞘組減少(P＜0.05）;卵巢去勢組與自然恢復組比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:雌激素對髓鞘再生具有促進作用。其可能的機制是通過促進少突膠質(zhì)細胞前體細胞的增殖，誘發(fā)少突膠質(zhì)細胞成熟分化以增強髓鞘再生，并且通過抑制