慢性阻塞性肺疾病基質(zhì)金屬蛋白酶、apelin的表達(dá)及糖皮質(zhì)激素的治療作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 觀察慢性阻塞性肺疾病(COPD)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物(TIMP)、apelin及血管緊張素Ⅰ型受體的相關(guān)蛋白(APJ)的變化，糖皮質(zhì)激素治療后對(duì)肺內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物影響；探討基質(zhì)金屬蛋白酶、apelin-APJ系統(tǒng)在COPD發(fā)生、發(fā)展中的作用及糖皮質(zhì)激素對(duì)COPD的治療意義和作用機(jī)制。方法：
　　 1 COPD動(dòng)物模型的制備：SD大鼠隨機(jī)分為三組：對(duì)照組、煙霧暴露組及布

2、地奈德治療組。除對(duì)照組外，其余兩組大鼠均每日在熏煙箱內(nèi)煙霧暴露，每日2次，每次連續(xù)被動(dòng)吸煙20支(1h)，持續(xù)4個(gè)月，布地奈德組在最后一個(gè)月給予布地奈德霧化治療。檢測(cè)大鼠肺功能、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞數(shù)量及分類并進(jìn)行肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察。
　　 2 采用ELISA法測(cè)定大鼠BALF中MMP-1、MMP-2及TIMP-2蛋白的表達(dá)；采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)定大鼠肺組織中MMP-1、MMP-2和TIMP-2mRNA的

3、表達(dá)。
　　 3 采用免疫組化檢測(cè)大鼠肺組織apelin和APJ蛋白的表達(dá)；應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)定大鼠肺組織中aplin及APJ mRNA的表達(dá)。
　　 4 采用ELISA法測(cè)定COPD患者外周血中apelin、NO、NOS和Ang-Ⅱ的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1 與對(duì)照組比較，煙霧暴露組肺功能FEV0.3/FVC、Cdy明顯下降，Ri、Re明顯升高(P＜0.01);BALF中性粒細(xì)胞百分比明顯

4、增多(P＜0.01)，淋巴細(xì)胞百分比下降(P＜0.05)，白細(xì)胞總數(shù)增加（P＜0.01）；內(nèi)襯間隔(MLI)及支氣管壁厚/外徑顯著增加，平均肺泡數(shù)(MAN)顯著降低（均P＜0.01）。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后FEV0.3/FVC、Re、Cdy有明顯的改善（P＜0.05），白細(xì)胞總數(shù)下降（P＜0.01），各分類細(xì)胞百分比、MAN、MLI及支氣管壁厚/外徑無(wú)明顯改變（P＞0.05）。
　　 2 煙霧暴露組BALF中MMP-1

5、、MMP-2及TIMP-2蛋白含量較對(duì)照組高(P＜0.01)；與煙霧暴露組比較，布地奈德組MMP-1下降（P＜0.05），MMP-2和TIMP則無(wú)明顯變化（P＞0.05）。煙霧暴露組MMP-1、MMP-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯增高，分別是對(duì)照組的20.39和7.85倍，布地奈德組MMP-1、MMP-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量下降，分別是對(duì)照組的3.01、4.35倍；煙霧暴露組TIMP-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量是對(duì)照組的1.83倍，布地奈德組

6、相對(duì)表達(dá)量增加，是對(duì)照組的2.61倍。MMP-1、MMP-2、TIMP-2 mRNA與FEV0.3/FVC呈明顯負(fù)相關(guān)(r分別為-0.37、-0.52、-0.40;P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05)。
　　 3 Apelin、APJ蛋白主要表達(dá)在支氣管肺組織的上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及部分肺泡壁細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，對(duì)照組及煙霧暴露組apelin、APJ蛋白均呈陽(yáng)性表達(dá)，但煙霧暴露組apelin、APJ蛋白表

7、達(dá)低于對(duì)照組(P＜0.05)。煙霧暴露組apelin、APJ mRNA相對(duì)表達(dá)量比對(duì)照組低44％及13％（P＜0.01）。大鼠肺組織apelin、APJ mRNA的表達(dá)與RV/(LV+S)均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r分別為-0.454、-0.448;均P＜0.05）。大鼠肺組織apelin、APJ mRNA的表達(dá)與FEV0.3/FVC呈正相關(guān)（r值分別為0.529，0.475;均P＜0.05）。
　　 4 COPD患者血漿apelin、N

8、O、NOS水平較正常人低，肺動(dòng)脈高壓組、心衰組進(jìn)一步下降（P＜0.05）；COPD患者血漿Ang-Ⅱ的濃度較正常人高(P＜0.05)。血漿apelin、NO、NOS含量與肺動(dòng)脈壓力呈線性負(fù)相關(guān)；apelin與FEV1％Pre呈正相關(guān)（r=0.797）；Ang-Ⅱ與FEV1％Pre呈負(fù)相關(guān)(r=-0.881)。
　　 結(jié)論：
　　 1 本實(shí)驗(yàn)采用香煙煙霧吸入成功制備了COPD大鼠模型，給予布地奈德治療后肺內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯

9、下降，并部分改善肺功能，但病理學(xué)未見(jiàn)明顯改變。
　　 2 MMP-1、MMP-2及TIMP-2在COPD大鼠肺內(nèi)表達(dá)增強(qiáng)，與COPD的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。布地奈德治療降低了MMP-1的表達(dá)，但未影響MMP-2及TIMP-2的表達(dá)，這可能與布地奈德能夠部分改善肺功能但不能改變病理形態(tài)有關(guān)。
　　 3 Apelin及其受體APJ蛋白和mRNA在COPD大鼠肺組織表達(dá)均下降，這可能與右心室肥大及肺功能下降密切相關(guān)，可能是導(dǎo)致大