T-bet等多項(xiàng)免疫指標(biāo)檢測在AA與MDS鑒別診斷中的意義.pdf

1、目的:通過比較再生障礙性貧血(aplasticanemia,AA)患者和骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndrome,MDS)患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞含量和比值、T-bet(TboxexpressedinTcells,T-bet)基因的表達(dá)及血清中干擾素γ(IFN-γ)水平差異,探討上述指標(biāo)對二者發(fā)病機(jī)制、鑒別診斷及臨床治療的指導(dǎo)意義。
　　 方法:1研究對象:14例AA患者及20例

2、MDS患者及30名健康者作為正常對照(normalcontrolNC)組。其中從患者14例,男8例、女6例,年齡范圍14～66歲,中位年齡26歲,其中慢性再生障礙性貧血(CAA)9例、重型再生障礙性貧血(SAA)5例。MDS患者20例,男9例、女11例,年齡范圍27～75歲,中位年齡58歲,按FAB分型,其中難治性貧血(RA)8例、原始細(xì)胞過多難治性貧血(RAEB)12例。正常對照30例,均取自常規(guī)體檢正常的人群,男女各15例,年齡范圍

3、20-75歲,中位年齡55歲。
　　 2研究方法:分離AA、MDS患者及正常對照組周血單個(gè)核細(xì)胞,采用免疫熒光標(biāo)記和三色流式細(xì)胞術(shù)檢測周血CD3+,CD4+,CD8+T細(xì)胞占T細(xì)胞比例;提取周血單個(gè)核細(xì)胞RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測T-bet基因的表達(dá)量,用ELISA法測定患者血清IFN-γ的表達(dá)。并對14例AA患者追蹤隨訪6個(gè)月,進(jìn)行治療前后的對比(均予以環(huán)孢素A5mg/kg.d為主的治療),收集患者基本臨床資料進(jìn)行

4、分析。
　　 結(jié)果:1T淋巴細(xì)胞免疫表型CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+表達(dá)1.1AA組CD3+T細(xì)胞百分率高于正常對照組(75.338±5.620VS67.441±12.817,P＜0.05);CD4+T細(xì)胞低于正常對照組,但相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(31.852±6.425VS33.424±8.415,P＞0.05);CD8+T細(xì)胞明顯高與正常對照組(34.956±6.206VS27.032±9.046P＜0.05)

5、;CD4+/CD8+相比對照組顯著下降(1.177±0.436VS1.484±0.378P＜0.05)。
　　 1.2MDS組CD3+T細(xì)胞百分率低于正常對照組(62.241±9.102VS67.441±12.817,P＜0.05);低危組CD3+T細(xì)胞百分率低于正常對照組,但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(65.803±13.859VS67.441±12.817,P＞0.05);高危組CD3+T細(xì)胞百分率低于正常對照組(52.417±12.5

6、85VS67.441±12.817P＜0.05)。MDS組,高危組CD4+T細(xì)胞百分率均高于正常對照組(39.283±9.913VS33.424±8.415P＜0.05,42.536±10.711VS33.424±8.415P＜0.05):低危組CD4+T細(xì)胞的百分率與正常對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(33.322±9.603VS33.424±8.415P＞0.05):MDS患者、低危組的CD8+T細(xì)胞百分率高于正常對照組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3

7、1.213±12.342VS27.032±9.046,32.101±13.004VS27.032±9.046P＞0.05);高危組CD8+T細(xì)胞百分率低于正常對照組,也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(26.634±3.568VS27.032±9.046P＞0.05)。MDS組,高危組CD4+/CD8+高于正常對照組(1.630±1.063VS1.484±0.378P＜0.05,1.801±1.089VS1.484±0.378P＜0.05);低危組的CD

8、4+/CD8+相比正常組沒有明顯差異(1.3313±0.424VS1.484±0.378P＞0.05)。
　　 1.3AA與MDS相比:AA組的CD3+T百分率(75.338±5.620)均高于MDS組(62.241±9.102)、低危組(65.803±13.859)及高危組(52.417±12.585),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AA組的CD4+T細(xì)胞百分率(31.852±6.425)均明顯低于MDS組(39.283±9

9、.913)及高危組(42.536±10.711),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AA組與低危組的CD4+T細(xì)胞百分率相比無明顯差異(31.852±6.425VS33.322±9.603P＞0.05)。AA組CD8+T細(xì)胞的百分率(34.956±6.206)均高于MDS組(31.213±2.342)、低危組(32.101±13.004)、高危組(26.634±3.568),但與低危組比較無明顯差異。AA組的CD4+/CD8+L值(1.1

10、77±0.436)均低于MDS組(1.630±1.063)、低危組(1.3313±0.424)、高危組(1.801±0.893),但與低危組比較無明顯差異。
　　 1.4從治療前后的比較,治療后的AA相比治療前,CD3+T細(xì)胞百分率(68.187±17.647)下降,CD4+T細(xì)胞百分率(33.453±8.362)升高,CD8+T細(xì)胞百分率(29.370±8.223)下降,CD4+/CD8+比值(1.221±0.425)升高,接

11、近正常。且CD3+T細(xì)胞,CD8+T細(xì)胞,CD4+/CD8+比值的變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2T-bet基因的表達(dá)量的比較2.1AA組和正常對照組相比T-bet基因的表達(dá)量是增高的,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.255±0.188VS0.092±0.058,P＜0.05)。
　　 2.2MDS組正常對照組相比T-bet基因的表達(dá)量是減低的(0.085±0.041VS0.092±0.058,P＜0.05);高危組T-

12、bet基因的表達(dá)量低于正常對照(0.061±0.018VS0.092±0.058,P＜0.05),低危組T-bet基因的表達(dá)量也低于正常對照組,但與正常對照組之間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.120±0.039VS0.092±0.058,P＞0.05)。
　　 2.3AA組T-bet基因的表達(dá)量(0.255±0.188)均高于MDS組(0.085±0.041),低危組(0.120±0.039)及高危組(0.061±0.018),均有

13、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.4AA組治療后T-bet基因的表達(dá)量相比治療前明顯下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.153±0.078VS0.255±0.188P＜0.05)。
　　 3血清IFN-γ的水平在各組中的比較3.1AA組血清IFN-r含量明顯高于正常對照組,兩組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(9.756±2.537VS7.552±0.640P＜0.05)。
　　 3.2MDS組血清中IFN-r含量明顯低于正常對

14、照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(5.365±2.338VS7.552±0.640P＜0.05)。低危組血清中IFN-r含量(7.845±1.094)明顯高于高危組(3.709±1.102),但與正常對照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(7.845±1.094VS7.552±0.640p＞0.05)。
　　 3.3AA組血清IFN-r含量(9.756±2.537)明顯高于MDS組(5.365±2.338),低危組(7.845±1.094)及高危組(3

15、.709±1.102),與各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)3.4AA組治療后的血清IFN-r含量相比治療前明顯下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(7.6822±2.338VS9.756±2.537P＜0.05)。
　　 4AA組和MDS組的T-bet基因的表達(dá)量和血清IFN-r含量的相關(guān)系數(shù)r值分別是0.64,0.70,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1T淋巴細(xì)胞的免疫表型CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD

16、8+AA組較MDS組CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞百分率明顯增高,CD4+T細(xì)胞百分率下降,CD4+/CD8+比值倒置,且AA組治療前后相比,T淋巴亞群紊亂得到糾正。說明T淋巴細(xì)胞免疫功能異常均參與了二者的發(fā)病。提示AA患者存在明顯的免疫功能亢進(jìn),可能與AA的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系,也提示免疫異常是MDS疾病的發(fā)生、發(fā)展的一個(gè)促發(fā)因素。流式細(xì)胞術(shù)檢測AA和MDS的T淋巴細(xì)胞免疫表型有助于我們明確機(jī)體的免疫狀態(tài),能更好的幫助我們鑒別兩者,

17、指導(dǎo)我們針對兩者的免疫狀態(tài)合理用藥。
　　 2T-bet基因和IFN-r的表達(dá)T-bet基因在AA中的表達(dá)量高于正常對照組,MDS中T-bet基因的表達(dá)量低于對照組,且AA9.756±2.537較MDS中表達(dá)量明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AA患者血清IFN-r含量明顯高于對照組,MDS患者則低于正常對照組。且各組的T-bet基因和血清IFN-r含量有明顯的相關(guān)性。AA組治療前后T-bet基因和血清IFN-r含量均明顯下降。提示A