轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中舌癌永生化細胞系建立與癌干細胞相關(guān)標記物的檢測.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明秉承學校嚴謹?shù)膶W風與優(yōu)良的科學道德，本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，不包含本人或他人己申請學位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切責任。論文作者簽名：專} 期≥毒砂 拋義作有登稻：勺F

2、卅，1 V日期：砌{ ；．6 ．熠卸：嘴p 妒保護知識產(chǎn)權(quán)說明’本人完全了解廣西醫(yī)科大學有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學位期間，博士后工作人員、人才小高地工作人員在校工作期間，論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬廣西醫(yī)科大學。本人保證在校期間和離校后，發(fā)表或使用論文工作成果時署名第一作者單位均為廣西醫(yī)科大學。學校有權(quán)保留論文，允許論文被查閱和借閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。論文作者簽名：

3、卸幻≥苛U日期：加鑼．易．搿鐘‘嚶抄轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中舌癌永生化細胞系建立與癌干細胞相關(guān)標記物的檢測摘要目的：在建立舌癌T c a 8 1 1 3 淋巴道轉(zhuǎn)移裸鼠模型的基礎(chǔ)上，建立永生化的舌癌細胞系，證實舌癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中存在癌干細胞的可能，并進一步檢測舌癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中癌干細胞相關(guān)標記物的表達情況。方法：采用癌細胞足墊注射法建立淋巴道轉(zhuǎn)移模型，4 周后取淋巴結(jié)進行原代細胞培養(yǎng)，從中分離、純化舌癌細胞進行連續(xù)傳代培養(yǎng)，并進行永生化細胞系的生物

4、學特性鑒定：①倒置相差顯微鏡下觀察活細胞形態(tài)、光鏡下觀察H E 染色細胞形態(tài)、透射電鏡觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)；②細胞核型分析染色體形態(tài)；③生長曲線與倍增時間測定分析增殖特性；④致瘤性實驗檢測成瘤能力；⑤連續(xù)傳代1 0 0 代以上。繼而采用永生化舌癌細胞系建立舌癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型，4 周后收集淋巴結(jié)，免疫組織化學染色檢測癌干細胞相關(guān)標記物C D 4 4 、B C R P 、E S A 蛋白的表達情況。結(jié)果：在淋巴道轉(zhuǎn)移模型中，H E 染色與E M

5、 A 免疫組化染色發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)有散在或灶性鱗狀上皮癌細胞轉(zhuǎn)移。進而取轉(zhuǎn)移模型裸鼠的淋巴結(jié)組織進行原代細胞培養(yǎng)，經(jīng)分離和純化以及連續(xù)傳代而建立舌癌永生化細胞系，命名為T c a 8 1 1 3 一M 1 ，目前傳代1 0 0 余代，時間近2 年，生長穩(wěn)定，倍增時問為2 2 ．5 1 h ，染色體眾數(shù)5 8 ，保持人染色體形態(tài)，細胞形態(tài)與T c a 8 1 1 3 細胞相似。T c a 8 1 1 3 叫1 在裸鼠體內(nèi)的成瘤率為l O o ％