獼猴桃葉片再生體系的建立和轉(zhuǎn)抗菌肽D基因?qū)ΡＷo酶活性的影響.pdf

1、獼猴桃（Actinidia chinensisPlanch.）是世界上一種重要的水果，該屬有54個種，21個變種，共約75個分類單元，其中中華獼猴桃（A.chinensis Planch.var.chinensis，果肉綠色）和美味獼猴桃（A.chinensisvar.deliciosa，果肉金黃色）是栽培最廣泛的的兩個商業(yè)種類。而軟棗獼猴桃（Actinidia argutaPlanch）目前僅有零星栽培，因其果面無毛，風(fēng)味獨特，是一種

2、具有發(fā)展前景的果樹資源。其中天源紅軟棗獼猴桃果皮、果肉和果心全為紅色，酸甜適口，光潔無毛，可帶皮直接食用，具有重要推廣經(jīng)濟價值。為了建立天源紅軟棗獼猴桃快繁體系，本試驗以組培苗葉片及莖尖為材料，探討了植物生長調(diào)節(jié)劑對葉片愈傷再生的影響。
　　獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病，是一種毀滅性細(xì)菌病害，對世界獼猴桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重的威脅。目前尚無有效方法抑制獼猴桃潰瘍病害的發(fā)生，而采取基因工程技術(shù)培育抗病性強的品種是避免潰瘍病帶來損失的有效方法之

3、一。本研究以轉(zhuǎn)抗菌肽D的中華獼猴桃為材料，誘導(dǎo)生根和移栽獲得了大量的獼猴桃盆栽苗，通過噴施獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病病原菌，分析獼猴桃噴施菌液前后相關(guān)酶活性的變化，預(yù)測轉(zhuǎn)基因植株的抗病性變化。
　　主要研究結(jié)果如下：
　?。?）不同濃度的6-BA和NAA對天源紅軟棗獼猴桃莖段增殖的影響分析結(jié)果表明，莖段增殖倍數(shù)隨著6-BA的濃度增加而增大，在6-BA濃度為3.0mg/L，NAA濃度為0.5mg/L時，莖段增殖倍數(shù)達到最大，為3.29

4、±0.03。
　　（2）不同濃度的ZT和6-BA對葉片形成愈傷的結(jié)果表明，6-BA和ZT對愈傷形成的影響有很大的不同。6-BA濃度從0.5mg/L到3.0mg/L，葉片均不能形成愈傷組織，褐化率高，而ZT能明顯誘導(dǎo)愈傷組織的形成，且褐化率較低。
　?。?）不同濃度的ZT和IAA對葉片再生率的影響結(jié)果表明，當(dāng)ZT濃度為2.5mg/L，IAA濃度為0.5mg/L時，葉片再生率達到最高，為45.00％。
　?。?）不同時間的

5、暗培養(yǎng)對葉片再生率的影響。以MS+ZT2.5mg/L+IAA0.5mg/L為基本培養(yǎng)基，分別進行15d,20d,25d,30d的暗處理，結(jié)果表明，當(dāng)葉片進行30d的暗處理，葉片再生率最高，為81.67%。
　?。?）以轉(zhuǎn)抗菌肽D的中華獼猴桃抗性芽為材料，通過誘導(dǎo)生根處理和移栽獲得了大量的獼猴桃盆栽苗，生根結(jié)果顯示，使用1.0g/L的IBA處理15s生根效果最好，形成的愈傷較少，且根系較多。
　?。?）轉(zhuǎn)基因獼猴桃的PCR和R

6、T-PCR檢測結(jié)果表明，外源抗菌肽D基因已經(jīng)整合到獼猴桃基因組中，并在獼猴桃基因組中進行轉(zhuǎn)錄，且不同株系間的外源基因的表達量有差異。
　?。?）對噴施菌液前后獼猴桃苗葉片中的過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性分析結(jié)果表明，轉(zhuǎn)抗菌肽D基因在獼猴桃基因組中的過量表達對獼猴桃葉片CAT、POD、PAL活性變化影響不明顯。但是在噴施病原微生物（菌液濃度為1.2×107～108，OD值為0.2左右）的