血壓波動對缺血后血管新生的影響及機制研究.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分、血壓波動模型的建立 目的:建立血壓波動模型。 方法:SD大鼠用鹽酸氯胺酮50mg/kg 加地西泮5mg/kg 腹腔注射麻醉，同時肌肉注射硫酸阿托品0.5mg/kg 以抑制呼吸道腺體的過多分泌。麻醉后大鼠仰臥位固定，頸部剪毛消毒，作頸部正中切口，鈍性分離肌肉直至暴露氣管，先行左側(cè)SAD，找出喉上神經(jīng)，切斷約2mm。從左側(cè)頸動脈鞘中仔細分離出頸總動脈和迷走神經(jīng)，將剩下的組織（包括主動脈神

2、經(jīng)、交感干和動脈鞘組織）一并切斷約2 mm。去除左頸動脈分叉處內(nèi)側(cè)的頸上神經(jīng)節(jié)，剝離左頸動脈分叉處的血管外膜和周圍組織，使頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈、枕動脈完全游離約5mm，用神經(jīng)毒試劑10％苯酚乙醇溶液涂擦這些血管四周以去除頸動脈竇區(qū)殘余神經(jīng)末梢。同樣方法去除右側(cè)竇弓神經(jīng)。最后縫合頸部切口，后肢肌肉注射青霉素鈉6 萬單位，完成整個SAD 手術(shù)。假手術(shù)組不做神經(jīng)分離和切除，其余步驟與SAD 手術(shù)相同。 結(jié)果:在SAD 手術(shù)后兩

3、周，血壓和心率與假手術(shù)組相比較無顯著差異，而血壓波動性顯著升高，大約是假手術(shù)組的三倍。SAD組和假手術(shù)組的大鼠手術(shù)后16周測定BRS 值，SAD組的BRS 值仍顯著低于假手術(shù)組。 結(jié)論:SAD手術(shù)后的大鼠是研究血壓波動的很好的動物模型，用SAD 手術(shù)后的大鼠作為研究血壓波動動物模型，其模型穩(wěn)定性良好。 第二部分、老年血壓波動及其對缺血后血管新生的影響 目的:探討年齡對血壓波動的影響以及血壓波動對下肢缺血后血管新生

4、的影響。 方法:雄性、SD大鼠為實驗對象，分為三組：老年組（18月齡）、成年組（16周齡）和幼年組（6周齡）。在清醒自由活動的大鼠上采用計算機化測壓技術(shù)連續(xù)記錄各組大鼠的24小時血壓。血壓波動值是由24小時內(nèi)每搏血壓值的標準差表示。測壓結(jié)束后，手術(shù)結(jié)扎切除各組動物的左側(cè)股動、靜脈造成單側(cè)下肢缺血，于術(shù)后第15天用血管造影法、毛細血管評分記數(shù)觀察下肢血管生成情況。 結(jié)果:老年組的收縮壓波動值(SBPV)明顯高于幼年組；老年

5、組SBPV與成年組無明顯差異，成年組SBPV與幼年組也無明顯差異；三組的舒張壓波動值(DBPV)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。術(shù)后第15天，毛細血管評分記數(shù)表明老年組明顯低于幼年組。 結(jié)論:血壓波動隨著年齡的增加而增大；血壓波動越大對缺血后血管新生抑制作用越大。 第三部分、血壓波動對缺血性后血管新生的影響的機制 目的:探討血壓波動性大導(dǎo)致下肢缺血后血管新生障礙的機制。 方法:16只12周齡的雄性、SD大鼠為實驗對象，

6、隨機分為兩組：SAD組（8只）和假手術(shù)組（8只）。兩組大鼠在兩周后分別做左后肢缺血手術(shù)，再兩周后處死大鼠取腹主動脈血和缺血下肢肌肉組織。免疫組化法測定兩組缺血下肢肌肉毛細血管密度（CD31染色）；免疫組化法測定肌肉組織中HIF1α和VEGF的表達；蛋白免疫印跡法測定肌肉組織中的乙酰膽堿轉(zhuǎn)運體、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶、煙堿型乙酰膽堿受體中的α7亞單位的表達水平；蛋白免疫印跡法測定肌肉組織中的HIF1α的表達水平；酶聯(lián)免疫吸附法測定肌肉組織勻漿中的

7、VEGF的表達水平。 結(jié)果:SAD組的缺血下肢肌肉毛細血管密度明顯低于假手術(shù)組；SAD組的缺血下肢肌肉組織勻漿中的VEGF明顯低于假手術(shù)組；SAD組的缺血下肢肌肉組織中的HIF1α的表達水平明顯低于假手術(shù)組；SAD組的缺血下肢肌肉組織中的乙酰膽堿轉(zhuǎn)運體、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶、煙堿型乙酰膽堿受體中的α7亞單位的表達水平明顯低于假手術(shù)組。 結(jié)論:血壓波動性大導(dǎo)致缺血后血管新生障礙的一個可能的機制是通過α7-nAChR功能下調(diào)使得H