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文檔簡介
1、目的：研究細粒棘球絳蟲抗原B（EgAgB)8-kDa亞單位基因家族成員（EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5)在蟲體發(fā)育各階段（蟲卵、棘球蚴生發(fā)層、原頭蚴及成蟲）基因表達的差異，為包蟲感染中間宿主和終末宿主的免疫學診斷篩選特異性優(yōu)勢表達抗原。方法：分別從細粒棘球絳蟲成蟲、蟲卵、原頭蚴和棘球蚴生發(fā)層提取總RNA，用AMV First Strand cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)
2、錄成cDNA，根據(jù)EgAgB 5個亞單位（EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5）序列設計跨越內(nèi)含子的基因特異性引物；基因表達差異應用SYBR Green I熒光實時定量PCR(Real-time PCR)技術進行定量分析并用內(nèi)參對照基因actin II來標準化定量結(jié)果。結(jié)果：成功建立標準曲線和SYBR Green I熒光實時定量PCR(Real-time PCR)技術對EgAgB階段性
3、基因表達的定量分析方法；分析顯示，EgAgB8/1和EgAgB8/2在棘球蚴生發(fā)層大量表達(68.874和16.258)， EgAgB8/3和EgAgB8/5在成蟲階段有大量表達(1905.512 and 180.315)，EgAgB8/4 在成蟲、蟲卵和原頭蚴的表達水平（0.001、0.088和0.102）均較棘球蚴生發(fā)層表達量（3.576）低。結(jié)論：EgAgB 5個亞單位的基因表達在蟲體發(fā)育各個階段顯現(xiàn)出明顯差異：①EgAgB8/1
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