細粒棘球絳蟲糞抗原的篩選及ELISA檢測方法的初步建立.pdf

1、棘球蚴?。ㄋ追Q包蟲?。┦怯杉毩＜蚪{蟲（Echinococcus granulosus）的中絳期（幼蟲）——細粒棘球蚴寄生于動物和人的肝、肺及其他器官而引起的一種呈世界性分布人獸共患病。棘球蚴病對人體健康和畜牧業(yè)發(fā)展都產(chǎn)生了嚴重的危害，它不僅是一個特殊的醫(yī)學和獸醫(yī)學問題，而且更是一個嚴重的社會經(jīng)濟問題。
　　蛋白質(zhì)組(proteome)是研究分析一個基因組表達的所有蛋白質(zhì)，主要利用雙向凝膠電泳(Two-Dimensional El

2、ectrophoresis，2-DE)作為其技術(shù)支撐。這一概念最早是在1994年的一次學術(shù)會議上由Marc Wilkins提出的。蛋白質(zhì)組學(proteomics)是研究某一生物、組織或細胞在特定條件下基因組所表達的全套蛋白質(zhì)特征的學科，其主要應用高分辨率的分離技術(shù)、質(zhì)譜鑒定技術(shù)以及生物信息學技術(shù)。
　　本研究通過人工感染細粒棘球蚴原頭節(jié)，收集感染后不同時間的犬糞樣品，進行蛋白質(zhì)提取和質(zhì)譜分析，采用蛋白質(zhì)組學、生物信息學、免疫學和

3、分子生物學技術(shù)篩選鑒定理想的診斷抗原，結(jié)果顯示，從糞上清液中共鑒定出蛋白質(zhì)3242個，其中宿主（犬）蛋白3107個，細粒棘球絳蟲蛋白135個。針對分析結(jié)果，選擇特異性蛋白EMR、GAPDH、TMEM41B進行基因克隆，構(gòu)建pET30a重組表達載體，在大腸桿菌中表達，用純化表達產(chǎn)物建立細粒棘球絳蟲感染犬糞抗原雙抗夾心ELISA檢測方法，以市售試劑盒檢測確定的20份自然感染細粒棘球絳蟲陽性犬糞上清為檢測樣品對篩選得到的蛋白進行評估。以重組蛋

4、白pET30a-EMR免疫的動物血清為包被一抗（捕獲抗體）時，檢出陽性率為35％;以重組蛋白pET30a-GAPDH免疫的動物血清為包被一抗時，檢出陽性率為45％;以重組蛋白pET30a-TMEM41B免疫的動物血清為包被一抗時，檢出陽性率為25％。對人工感染多房棘球絳蟲的犬糞樣品進行檢測，以重組蛋白pET30a-EMR免疫血清包被時，多房棘球絳蟲的檢測呈陽性，多頭帶絳蟲、泡狀帶絳蟲檢測顯示為陰性;以重組蛋白pET30a-GAPDH免疫

5、血清包被時，多房棘球絳蟲、多頭帶絳蟲、泡狀帶絳蟲檢測顯示均為陽性;以重組蛋白pET30a-TMEM41B免疫血清包被時，多房棘球絳蟲、多頭帶絳蟲的檢測為陽性，泡狀帶絳蟲檢測顯示為陰性。
　　本研究旨在建立細粒棘球絳蟲糞抗原ELISA檢測方法，能夠及時、準確地檢測流行區(qū)終末宿主棘球絳蟲感染情況，從而為制定綜合防控措施，控制棘球蚴病的流行提供技術(shù)支撐。本研究的方法和結(jié)果為今后進一步篩選和鑒定理想候選診斷抗原，研制犬細粒棘球絳蟲感染糞抗