精子肽的合成及ELISA檢測方法的建立和初步應用.pdf

1、據(jù)報道，免疫性不孕最近幾年發(fā)病率逐年上升。研究表明抗精子抗體是導致免疫性不孕的重要原因之一，抗精子抗體的檢測方法很多，其中臨床上又以酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)應用較廣泛。該方法通常是利用具正常生育能力者的精子直接包被酶標板或制成包被抗原來包被酶標板，但其穩(wěn)定性和重復性不理想，且精子來源有限,從而限制了它在臨床上的推廣應用。固相多肽合成技術(shù)的發(fā)展為解決這一問題帶來了希望，據(jù)文獻報道，我們選取了5條特異性精子肽，采用固相多肽合成法(so

2、lid phase polypeptide synthesis SPPS),以N-a-Fmoc-氨基酸為原料，F(xiàn)moc-aa-Wang樹脂為固相載體，20％六氫吡啶的DMF溶液為脫保護試劑，以TBTU/HoBT作為偶聯(lián)試劑/活化劑,經(jīng)過脫保護-洗滌-縮合-洗滌循環(huán)步驟，從C端-N端的順序依次偶聯(lián)氨基酸,直至所需目的肽段，最后由切肽試劑將合成多肽從樹脂上裂解下來，同時脫去所有側(cè)鏈保護基團，最終合成了5條特異性精子肽.所得粗肽再經(jīng)過離子交換

3、層析和反相高效液相色譜純化鑒定，得到了純度>95％的精子肽。 利用5條合成肽分別包被酶標板建立ELISA方法檢測抗精子抗體，結(jié)果表明，各肽段抗體反應性存在明顯的差異。因此，我們選擇了2個高抗體反應性的肽段（YLP12,P69），并建立了以組合肽為包被抗原的檢測抗精子抗體的ELISA方法，與商品化的抗精子抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒相比，結(jié)果顯示，組合肽包被的ELISA方法與商品化試劑盒檢測結(jié)果二者有良好的符合率，統(tǒng)計學分析并無明顯差異