不同藥物對內(nèi)毒素休克大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和內(nèi)皮素及腎臟細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：膿毒癥（Sepsis）是嚴(yán)重創(chuàng)（燒、戰(zhàn)）傷、休克、感染、外科大手術(shù)患者常見的并發(fā)癥，進(jìn)一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒癥休克、多器官功能障礙綜合征（MODS），是臨床危重患者的最主要死亡原因之一。最近十多年盡管新的抗生素不斷問世，重癥護(hù)理也不斷改進(jìn)，但膿毒癥的死亡率仍居高不下。隨著對膿毒癥發(fā)生機(jī)制的深入了解，認(rèn)為在膿毒癥休克時，微循環(huán)的改變是影響治療和預(yù)后的重要因素，經(jīng)積極復(fù)蘇后盡管體循環(huán)已獲改善，但仍存在微循環(huán)灌注不足，即隱匿性休克。許多動物

2、研究顯示山莨菪堿和前列地爾能改善內(nèi)毒素休克大鼠的微循環(huán)，發(fā)揮抗休克作用。本研究應(yīng)用靜脈注射內(nèi)毒素（LPS）的方法制作內(nèi)毒素休克大鼠模型進(jìn)而觀察內(nèi)毒素休克時腎臟功能的改變及應(yīng)用改善微循環(huán)的藥物（山莨菪堿和前列地爾）后腎功能有否好轉(zhuǎn)，并為膿毒癥休克的臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法：清潔級健康雌性wistar大鼠50只，體重200-250g（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，合格證編號：71043）。隨機(jī)分為5組，每組10只。Ⅰ組：對照組

3、；Ⅱ組：內(nèi)毒素休克模型組；Ⅲ組：去甲腎上腺素干預(yù)組；Ⅳ組：前列腺素干預(yù)組；Ⅴ組：山莨菪堿干預(yù)組。各實(shí)驗(yàn)組按處死大鼠留取標(biāo)本時間點(diǎn)（1小時和3小時），分為2組，每組5只。每組大鼠均行氣管切開、左側(cè)頸動脈置管測壓用及左側(cè)股靜脈置管給藥用。本實(shí)驗(yàn)采用左側(cè)股靜脈持續(xù)泵入大腸桿菌內(nèi)毒素（LPS）的方法制作內(nèi)毒素休克的模型，以平均動脈壓下降30％視為造模成功的標(biāo)志。給藥方法如下：Ⅰ組：對照組（左股靜脈泵入等量生理鹽水）；Ⅱ組：內(nèi)毒素休克模型組（L，

4、PS10mg/kg）；Ⅲ組：去甲腎上腺素干預(yù)組（LPS10mg/kg+去甲腎上腺素0.1mg/kg.h）；Ⅳ組：前列腺素干預(yù)組（LPS10mg/kg+前列腺素50ug/kg.h）；Ⅴ組：山莨菪堿干預(yù)組（LPS10mg/kg+山莨菪堿10mg/kg.h）。對照組大鼠置管成功后即留取腎臟及血液標(biāo)本。膿毒癥模型組大鼠制模成功后1h、3h留取腎臟及血液標(biāo)本。去甲腎上腺素干預(yù)組、山莨菪堿干預(yù)組及前列腺素干預(yù)組分別于制膜成功后靜脈給予去甲腎上腺素、

5、山莨菪堿及前列腺素，并于1h，3h后留取標(biāo)本。應(yīng)用流式細(xì)胞儀對腎組織進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測以確定各實(shí)驗(yàn)組凋亡細(xì)胞數(shù)量；留取的血清標(biāo)本進(jìn)行內(nèi)皮素檢測；應(yīng)用誘導(dǎo)型一氧化氮合酶試劑盒對腎臟標(biāo)本進(jìn)行誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1、Ⅱ組（內(nèi)毒素休克模型組）1h和3h時間段誘導(dǎo)型一氧化氮合酶持續(xù)升高，與Ⅰ組（對照組）相比有顯著性差異（P<0.05）；Ⅳ組（前列地爾干預(yù)組）和Ⅴ組（山莨菪菪堿干預(yù)組）與Ⅱ組1h和3h兩個

6、時間段相比誘導(dǎo)型一氧化氮合酶水平降低，差別有顯著性（P<0.05）。Ⅲ組（去甲腎上腺素干預(yù)組）與Ⅱ組1h和3h兩個時間段相比誘導(dǎo)型一氧化氮合酶水平降低，差別無顯著性（P>0.05）。
　　 2、腎臟凋亡細(xì)胞百分比：Ⅱ、Ⅲ組凋亡細(xì)胞百分比隨時間延長逐漸升高，與Ⅰ組相比有顯著性差異（P<0.05）；Ⅲ組1h和3h與Ⅱ組1h、3h均無顯著性差異（P>0.05）；Ⅳ組和Ⅴ組第1、3小時凋亡細(xì)胞百分比較Ⅱ組和Ⅲ組低，差別有顯著性（P值<0

7、.05）。
　　 3、血清內(nèi)皮素-1：Ⅱ組1h和3h時間段持續(xù)升高與Ⅰ組相比有顯著性差異（P<0.05）；Ⅳ組和Ⅴ組1h和3h兩個時間段血清內(nèi)皮素-1與Ⅱ組相比均下降，差別有顯著性（P<0.05）；Ⅳ組與Ⅴ組相比無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、應(yīng)用靜脈持續(xù)小劑量輸入LPS的方法可制造出內(nèi)毒素休克的模型。
　　 2、內(nèi)毒素休克時血清內(nèi)皮素水平、腎臟誘導(dǎo)型一氧化氮合酶及腎臟凋亡細(xì)胞百分

8、比均明顯升高。
　　 3、山莨菪堿和前列腺素E-1均可降低血清內(nèi)皮素水平、腎臟誘導(dǎo)型一氧化氮合酶水平及腎臟凋亡細(xì)胞百分比。其機(jī)制可能是：PGE1能抑制血管平滑肌細(xì)胞的游離鈣離子，抑制交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素，使血管平滑肌舒張，血管擴(kuò)張，改善微循環(huán)；山莨菪堿可抑制去甲腎上腺素誘導(dǎo)的微血管痙攣和擴(kuò)張小血管，對抗自由基損傷的作用。
　　 4、去甲腎上腺素不能降低血清內(nèi)皮素水平和腎臟誘導(dǎo)型一氧化氮合酶以及腎臟凋亡細(xì)胞百分比。