TRPC6在足細胞的表達及其與足細胞損傷修復相關性研究.pdf

1、目的：足細胞的裂孔隔膜(slit diaphragm，SD)是腎小球濾過屏障的關鍵組成部分，新近發(fā)現(xiàn)的裂孔隔膜蛋白[1,2]瞬時受體電位陽離子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6，TRPC6)是一個非選擇性陽離子通道蛋白，它與Nephrin、Podocin等重要的裂孔隔膜分子共同組成一個信號傳導復合物(signaling complex)以維持足突及裂孔隔膜結構和功能的完

2、整性。本文旨在探討TRPC6蛋白在小鼠足細胞系MPC5(mouse podocyte clone 5，MPC5)的表達及其表達變化與足細胞損傷、修復的相關性。 方法： 1、條件永生型小鼠足細胞系MPC5培養(yǎng)：根據(jù)文獻[3]將復蘇MPC5細胞，于33℃中增殖培養(yǎng)，平均3～4天達80％以上融合傳代。換于37℃中培養(yǎng)，10～14天分化為成熟，此時為分化態(tài)MPC5，用于實驗； 2、通過反轉錄酶-聚合酶鏈反應(RT-PCR

3、)、免疫蛋白印跡(Western blotting)檢測TRPC6在分化態(tài)MPC5的表達；　　3、TRPC6與足細胞骨架蛋白關系研究：將分化態(tài)MPC5分兩組，正常對照組(組1)不做任何處理，細胞松解素處理組(組2)加細胞松解素D(cytochalasin D) (2.5 μmol/mL)作用6小時，用Western blotting方法檢測兩組TRPC6的表達量： 4、TRPC6與足細胞損傷及修復研究：建立正常對照組，嘌呤霉素

4、核苷酸(PAN)腎病足細胞模型組，地塞米松干預組(0.01 μmol/L，7d)，卡托普利干預組(10μmol，12 h、24 h、48 h、72 h)，全反式維甲酸(ATRA)干預組(0.2 μmol，24 h、48 h、72 h、96 h、120 h)，用Western blotting方法檢測各組TRPC6的表達量。 結論： 1、從mRNA水平及蛋白水平證實，在分化態(tài)MPC5能正常表達TRPC6基因和蛋白質。