益氣活血法影響單側(cè)腎切除DM大鼠足細胞及足細胞裂孔膜相關(guān)分子表達研究.pdf

1、目的:
　　1、應(yīng)用單側(cè)腎臟切除術(shù)結(jié)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ）單次腹腔注射法建造單側(cè)腎切除糖尿病(DM)大鼠模型。通過測量單側(cè)腎切除DM大鼠的血糖、血肌酐、血尿素氮、甘油三脂、尿微量蛋白和尿總蛋白，以及觀察腎臟病理改變，探討以“三芪口服液”為代表的益氣活血法對單側(cè)腎切除DM大鼠腎臟足細胞的保護作用。
　　2、應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察足細胞裂孔隔膜相關(guān)分子變化，進一步探討三芪口服液保護足細胞、延緩糖尿病腎小球硬化進展的分子生

2、物學(xué)可能機制，為該方的臨床合理應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)，同時為三芪口服液治療糖尿病腎損害提供思路及方法。
　　方法:
　　1、選取健康SPF級雄性SD大鼠36只，體重183.6～245.8g。按體重及生長狀況隨機分為：①假手術(shù)組（n=6）：1％戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉（4.5mL/kg），開腹后即行切口縫合。②手術(shù)組（n=30）：1%戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉后行右腎切除術(shù)。10～12天后切口愈合，大鼠禁食不禁水約12小時后，手術(shù)

3、組予以腹腔注射STZ溶液（35mg/kg）。假手術(shù)組腹腔注射同等劑量的檸檬酸緩沖液。注射藥物后觀察對比2組大鼠的飲食、活動、體貌等變化。給藥后1周，連續(xù)2天同一時間點尾靜脈取血測量隨機血糖，按照連續(xù)2次隨機血糖≥16.8mmol/L為成模標(biāo)準(zhǔn)，篩選合格的糖尿病成模動物。
　　2、參照血糖水平，成模糖尿病大鼠20只，隨機分為模型組（n=10）和中藥組（n=10），每周測1次血糖，應(yīng)用胰島素，控制血糖16.8～20mmol/L。分組后

4、每日固定時間灌胃，中藥組予以三芪口服液（用量按照人與大鼠體表面積換算，合生藥2.5g/kg，以蒸餾水稀釋為0.25g/ml濃度），模型組和假手術(shù)組均予以相同容積的蒸餾水，共8周。
　　3、動物實驗分為兩部分，第一部分：檢測血糖、尿素氮、血肌酐、甘油三脂、尿總蛋白和尿微量蛋白，光鏡觀察腎臟病理，電鏡觀察足細胞形態(tài)，分析足細胞變化；第二部分：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠腎臟足細胞裂孔膜相關(guān)分子nephrin、podocin和CD2AP

5、表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、模型組和中藥組血糖、血尿素氮、甘油三脂較假手術(shù)組明顯升高，模型組血糖、血尿素氮、血肌酐與中藥組比較未見統(tǒng)計學(xué)差異。中藥組甘油三脂、微量尿蛋白和尿總蛋白較模型組有下降趨勢。
　　2、光鏡下模型組、中藥組腎小球及間質(zhì)均有明顯病理改變，假手術(shù)組未見明顯損傷；電鏡下，模型組GBM模糊、增厚，系膜區(qū)彌漫增寬，中藥組相對減輕，假手術(shù)組未見明顯病理改變；與假手術(shù)組比較，模型組、中藥組足細胞密度減少，足

6、突寬度增加；與模型組比較，中藥組足細胞密度增多，足突寬度縮小。
　　3、免疫組化陽性表達區(qū)域的平均光密度分析顯示，模型組、中藥組大鼠腎組織中nephrin、podocin和CD2AP的表達均較假手術(shù)組下降；與模型組相比，中藥組三種蛋白的表達均有不同程度增多。
　　結(jié)論：
　　1、益氣活血中藥復(fù)方“三芪口服液”對單側(cè)腎臟切除DM大鼠腎臟足細胞具有保護作用。
　　2、益氣活血中藥復(fù)方“三芪口服液”對單腎切除DM大鼠的