氨基胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia/reperfusion iniury，MIRI)是圍手術(shù)期面臨的一種常見(jiàn)的病理生理變化。已成為阻礙缺血心肌從再灌注療法中獲得最佳療效的主要難題，因而對(duì)于缺血心肌保護(hù)的研究是倍受關(guān)注的課題。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)均表明，自由基在缺血再灌注損傷的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，清除自由基可促進(jìn)缺血后心肌的功能恢復(fù)，減輕再灌注損傷。細(xì)胞凋亡是心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)之一，線粒體在

2、細(xì)胞整合各種凋亡刺激信號(hào)的過(guò)程中處于樞紐地位。作為體內(nèi)的一種重要化學(xué)遞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子，NO一直倍受醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。人們對(duì)其在體內(nèi)各種生理和病理過(guò)程中的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了大量研究，許多研究結(jié)果表明，NO在心肌缺血再灌注損傷中起著十分重要的作用，但關(guān)于NO在心肌缺血再灌注損傷中的作用，仍是一個(gè)尚存有爭(zhēng)議的問(wèn)題。氨基胍為iNOS抑制劑，其對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。 本研究通過(guò)建立缺血再灌注心肌損傷動(dòng)物模型，觀察氨基胍對(duì)心肌的

3、機(jī)械功能、能量代謝、形態(tài)損傷等的改善作用，并探討氨基胍的心肌保護(hù)作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分氨基胍對(duì)缺血再灌注損傷大鼠心肌自由基的影響目的：觀察氨基胍對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響并從氧化應(yīng)激探討其作用機(jī)制。 方法：阻斷大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支30min，再灌注2h引起心肌缺血再灌注損傷。30只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)和氨基胍100mg/kg組(AG)，每組10只。P

4、owerIab/8s多導(dǎo)生理儀記錄各組大鼠缺血再灌注2h末左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVDEP)、左室壓力變化速率(±dp/dtmax)；測(cè)定血清中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性、一氧化氮(NO)含量及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性；測(cè)定心肌組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量，透射電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果： 1.再灌注2h末，與假手術(shù)組比較，I/R組LVDP

5、、±dp/dtmax明顯降低(P＜0.05,P＜0.01.)，LVDEP明顯升高(P＜0.05)。血清LDH和CK活性明顯增強(qiáng)(P＜0.01)；與I/R組比較，氨基胍組能明顯改善缺血再灌后的心功能(P＜0.05)，降低血清LDH、CK的活性(P＜0.05)。 2.與假手術(shù)組比較，I/R組SOD活性明顯降低(P＜0.01)。而MDA、 NO的含量明顯增加、iNOS活性明顯增強(qiáng)(P＜0.01)；與I/R組比較，氨基胍組SOD活性明顯

6、增強(qiáng)(P＜0.01)，MDA、NO的含量明顯減少(P＜0.05)，iNOS活性明顯降低(P＜0.01)。 3.超微結(jié)構(gòu)觀察顯示：I/R組心肌纖維排列紊亂，心肌細(xì)胞間及核周高度水腫；肌纖維減少、肌節(jié)消失；線粒體膜嚴(yán)重腫脹，部分線粒體基質(zhì)水腫，嵴排列紊亂，斷裂、溶解、消失，可見(jiàn)線粒體髓樣化，線粒體內(nèi)糖原顆粒明顯減少。氨基胍組心肌組織的超微結(jié)構(gòu)特別是線粒體損傷明顯減輕。結(jié)論：氨基胍對(duì)大鼠缺血再灌注損傷心肌有一定的保護(hù)作用，減少缺血再灌

7、注情況下自由基的含量，降低氧化應(yīng)激造成的損傷可能是其作用機(jī)制之一。 第二部分氨基胍對(duì)缺血再灌注損傷大鼠心肌線粒體功能及細(xì)胞凋亡的影響目的：觀察氨基胍對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響并從線粒體功能及細(xì)胞凋亡方面探討其作用機(jī)制。 方法：阻斷大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支30min，再灌注2h引起心肌缺血再灌注損傷。30只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)、氨基胍100mg/kg組(AG)，每組10只。Pow

8、erIab/8s多導(dǎo)生理儀記錄各組大鼠缺血再灌注2h末左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVDEP)、左室壓力變化速率(±dp/dtmax)；差速離心法提取心肌線粒體，測(cè)定線粒體活性、膜腫脹度，以及線粒體總ATP酶、超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率、免疫組化法測(cè)定Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.再灌注2h末，與假手術(shù)組比較，I/R組LVDP，±dp/dtmax明

9、顯降低(P＜0.01)，LVDEP明顯升高(P＜0.05)；AG組LVDP、±dp/dtmax明顯高于I/R組(P＜0.05,P＜0.01)，LVDEP明顯低于I/R組(P＜0.05)。表明氨基胍改善了缺血再灌注后的心功能。 2.I/R組心肌線粒體總ATP酶、SOD活性明顯低于假手術(shù)組(P＜0.01)，MDA含量明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)，線粒體膜腫脹度、線粒體活性下降，表現(xiàn)為540nm和570nm處吸光度值下降(P＜0.

10、01)；與I/R組比較，氨基胍組總ATP酶、SOD活性明顯升高(P＜0.05,P＜0.01)，MDA含量明顯減少(P＜0.05)，心肌線粒體活性有所恢復(fù)，膜腫脹度減輕(P＜0.01)。 3.I/R組心肌細(xì)胞凋亡率(15.38±0.48)明顯高于假手術(shù)組(5.18±0.33)(P＜0.01)；氨基胍組心肌細(xì)胞凋亡率(13.55±0.93)明顯低于I/R組(P＜0.01)。I/R組Bcl-2和Bax表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分率較假手術(shù)組明顯