乏氧誘導(dǎo)因子-1α與食管鱗癌血管生成和化療療效的關(guān)系及其機(jī)制.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文乏氧誘導(dǎo)因子-1α與食管鱗癌血管生成和化療療效的關(guān)系及其機(jī)制姓名：吳欣愛(ài)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：孫燕;樊青霞20070501鄭州大學(xué)2 0 0 7 年博士畢業(yè)論文 中文摘要系，本文采用半定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)及免疫組化技術(shù)檢測(cè)食管鱗癌組織中H I F ．1 a 在m R N A 水平及蛋白水平的表達(dá)，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)食管鱗癌組織中V E G F 、C D 3 4 的表達(dá)，觀(guān)察了H I F —l a

2、在食管癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征、V E G F 和微血管密度的關(guān)系。為了探討H I F ．1 a 是否通過(guò)上調(diào)V E G F 的表達(dá)而促進(jìn)食管癌血管生成的機(jī)制，本文以食管鱗癌細(xì)胞株E C 9 7 0 6 為研究對(duì)象，通過(guò)化學(xué)性乏氧誘導(dǎo)劑氯化鈷( c o b a l t c h l o r i d e ，C o C l 2 ) 建立乏氧模型，體外模擬腫瘤乏氧微環(huán)境。采用半定量R T - P C R 、W e s t e m - b

3、 l o t 、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)乏氧誘導(dǎo)的H I F —l a 、V E G F 表達(dá)情況。進(jìn)一步利用R N A 干擾技術(shù)( R N A i n t e f e r c n c e ,R N A i ) 觀(guān)察小干擾R N A ( s m a l li n t e r f e r e n c eR N A ，s i R N A ) 轉(zhuǎn)染E C 9 7 0 6 細(xì)胞后乏氧誘導(dǎo)的H I F ．1 c t 和V E G F 的表達(dá)的改變，初

4、步探討了H I F —l a 在乏氧條件下對(duì)食管癌血管生成的調(diào)控作用及其機(jī)制以及以H I F ．1 a 為靶點(diǎn)抗食管癌血管生成治療的可能性。為探討H I F ．1 a 是否與食管癌化療耐藥有關(guān)及其參與耐藥的機(jī)制，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)食管鱗癌組織中H I F —l a 的表達(dá)，并與臨床化療療效相結(jié)合，探討H I F ．1 a 與食管癌化療療效的關(guān)系。從體外方面，以E C 9 7 0 6 為研究對(duì)象，通過(guò)化學(xué)性乏氧誘導(dǎo)劑建立乏氧模型，采用M

5、 T S 、半定量R T - P C R 、免疫細(xì)胞化學(xué)、R N A干擾技術(shù)進(jìn)一步從多藥耐藥、凋亡、細(xì)胞周期等方面，探討了H I F 。l a 參與食管癌細(xì)胞乏氧條件下對(duì)不同機(jī)制的化療藥物產(chǎn)生耐藥的機(jī)制。并進(jìn)一步體外探討以H I F ．1 a 為新的靶點(diǎn)，應(yīng)用R N A 干擾技術(shù)逆轉(zhuǎn)食管癌耐藥的新途徑。為以此為突破口進(jìn)一步提高食管癌的化療水平提供理論依據(jù)。第一部分乏氧誘導(dǎo)因子．1 a 在食管鱗癌組織中的表達(dá)及乏氧調(diào)節(jié)方法1 ．應(yīng)用半定量