可調(diào)控的煙草葉綠體轉(zhuǎn)基因表達(dá)體系研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文可調(diào)控的煙草葉綠體轉(zhuǎn)基因表達(dá)體系研究姓名：李朔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：侯丙凱胡贊民20050507由東大學(xué)確士擎搜論文摘要利用葉綠體轉(zhuǎn)蒸因技術(shù)，有可能在高等植物葉綠體中黼教表達(dá)外源蛋白，與核轉(zhuǎn)優(yōu)技術(shù)相比較，有表達(dá)效率贏，安全性好、可贏接表達(dá)鰓梭基因等特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)。但同細(xì)胞核轉(zhuǎn)基因一樣葉綠體轉(zhuǎn)纂因也存在抗生素標(biāo)記的生物安壘性和外潺基因的過(guò)蠢表達(dá)對(duì)植物最常生長(zhǎng)發(fā)育的影響的問(wèn)題。率論文對(duì)在煙草中建立轅矮互捧酶

2、時(shí)綠倭表述體系迸囂了探索。羧質(zhì)豆作鮑峙綠體表達(dá)伴系的建立是潮時(shí)對(duì)媧革豹許綠俸熬禹綴和撩基因筑迸彳亍轉(zhuǎn)純，簌棱蕊因緞中轉(zhuǎn)入己酵誘等型襄動(dòng)子(AIc襄動(dòng)子)寇動(dòng)下的T7R融聚合酶基因，面農(nóng)時(shí)綠體孛轉(zhuǎn)入w患動(dòng)芋啟動(dòng)下妁，澡基醫(yī)(GUS或納要激酶腿，。遮樣。瓢可班實(shí)現(xiàn)外源基因在時(shí)綠體牛的舞效表達(dá)叉能耐其進(jìn)行人芏調(diào)控，藤雖舉襄影魄攘撩孵正常生長(zhǎng)。在零論文中，蘺先撒煙草進(jìn)符7核基因綴轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)入包岔Alc啟動(dòng)子的”RNA聚臺(tái)酶基因表：逸盒，對(duì)轉(zhuǎn)化植株

3、進(jìn)行了PCR和基嗣組Southernblot檢鍘和RT_PcR檢測(cè)證明了外源然因的插入和表達(dá)。其次，構(gòu)建了兩個(gè)煙草葉綠體表達(dá)載伴和兩個(gè)葛蕊旰綠體表達(dá)載體，它們分鬟包括斕草和萵葭的時(shí)綠體同源片段、不弼井源基鞠《GUS和A黔的禽T7精動(dòng)子的裘達(dá)盎以及篩選標(biāo)記基因BA潮的盱綠律表達(dá)盎，并對(duì)胼構(gòu)熊羲體中豹BADH表達(dá)盒在大腸稈蕾中的表達(dá)逃學(xué)了酶活檢測(cè)。最后，懲梅建的時(shí)綠侮表達(dá)載體秘賽驗(yàn)室甚宥撼以8蒯坶篩選標(biāo)記羹囂靜煙革蜂綠體表這載俸分嬲對(duì)野生鷲

4、煙草稚T7RNA聚合懿按轉(zhuǎn)純煙草進(jìn)行時(shí)綠體轉(zhuǎn)化，得到抗性植橡，著對(duì)轉(zhuǎn)純的綣果迸行了分據(jù)。論文中還對(duì)非抗生索篩選標(biāo)記基因BADH在煙萆葉綠體轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用進(jìn)行了嘗試t得到了一拙魏菜堿醛抗性和PCR辯蛙轉(zhuǎn)化植撩，井初步褥出了箕應(yīng)用有局限性的結(jié)論。在論文的第=部分巾，發(fā)現(xiàn)了化合物甜菜堿醚對(duì)組織培葬中萵苣分化再生的促進(jìn)作用實(shí)驗(yàn)證明。在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃魔(5raM)的甜菜堿醛可以顯著增強(qiáng)蘺苣分仡褥生麓力，其愈傷組織誘替率和分純率分割提商293％和