低能量激光照射對(duì)子癇前期大鼠臟器組織形態(tài)學(xué)的影響.pdf

1、子癇前期（pre-eclampsia）和子癇（eclampsia）是妊娠期特有的疾病，發(fā)生在妊娠20周以后，表現(xiàn)為以高血壓、蛋白尿、水腫為主要特征的多器官功能損害的綜合征，嚴(yán)重威脅母嬰安全和健康，是產(chǎn)科死亡的重要原因之一，但其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不完全清楚，目前普遍認(rèn)為特發(fā)性小動(dòng)脈痙攣、血管內(nèi)皮損傷是子癇和子癇前期發(fā)病機(jī)理的中心環(huán)節(jié)和基本特征。血管內(nèi)皮細(xì)胞有重要的內(nèi)分泌功能，通過(guò)自分泌釋放血管活性因子，如一氧化氮、內(nèi)皮素、前列腺素等調(diào)節(jié)

2、血管舒縮，協(xié)調(diào)凝血與抗凝血間的平衡，參與組織與血液間物質(zhì)的交換。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受細(xì)胞毒性物質(zhì)和炎性介質(zhì)，如腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）作用時(shí)，可引起血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致血管收縮因子和舒張因子比例失調(diào)，出現(xiàn)子癇前期和子癇一系列病理變化[1]。Faas等[2]最早發(fā)現(xiàn)低劑量?jī)?nèi)毒素（1.0μg/kg）可使孕鼠血壓逐漸升高，并能維持較高的血壓水平，產(chǎn)后血壓有下降趨勢(shì)，利用內(nèi)毒素可以制備較理想

3、的子痛前期動(dòng)物模型。有實(shí)驗(yàn)報(bào)道內(nèi)毒素可以促使單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞釋放TNF-α[3]，TNF-α可以刺激血管收縮的物質(zhì)內(nèi)皮素的釋放[4]。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究[5-6]也表明內(nèi)毒素（endotoxin，ET）刺激天然免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的過(guò)度炎癥反應(yīng)在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過(guò)程中具有重要作用。鑒于這些研究報(bào)道，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中選擇應(yīng)用低劑量的內(nèi)毒素注射建立子癇前期的大鼠模型。 由于子癇前期和子癇的病因和發(fā)病機(jī)制沒有定論，所以在在子癇前

4、期和子癇的預(yù)防及治療方面雖然取得了一些進(jìn)展，例如硫酸鎂的合理應(yīng)用避免了中毒等副作用的發(fā)生及抗凝劑蛋白S、蛋白C的應(yīng)用阻止了彌漫性血管內(nèi)凝血（dessiminated intiavascular coagulation，DIC）的發(fā)生等，但是所有這些方法都是化學(xué)藥物治療，有其副作用，而且至今沒有提出新的有效的治療方法。近年來(lái)隨著對(duì)低能量激光生物作用的深入研究，發(fā)現(xiàn)低能量激光照射有降血粘度、降血脂、提高紅細(xì)胞攜氧能力，改善微循環(huán)，并具有活化

5、酶，提高免疫功能和抗氧化功能等作用，因此在臨床已用于腦梗死、高血壓、高血脂、冠心病、糖尿病、肺部疾患、偏頭痛、肝炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏性鼻炎等200多種疾病的治療，并且取得了可靠的療效[7]。鑒于低能量激光的以上治療作用，我們考慮子癇前期也有血壓升高及血液流變方面的改變，不知將低能量激光應(yīng)用于子癇前期的治療是否同樣有效，目前國(guó)內(nèi)外尚沒有文獻(xiàn)報(bào)道，這是本實(shí)驗(yàn)研究的甘的所在。 目的: 1.為了更好地研究子癇前期的病因和發(fā)病機(jī)

6、制及新的預(yù)防和治療方法，需要穩(wěn)定的動(dòng)物模型。從Faas等研究報(bào)道內(nèi)毒素可以建立子癇前期大鼠模型以來(lái)，越來(lái)越多的研究[8-9]傾向于應(yīng)用內(nèi)毒素建立子癇前期動(dòng)物模型。我們查閱文獻(xiàn)比較了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)以后，選擇應(yīng)用低劑量的內(nèi)毒素建立子癇前期大鼠模型，為下一步的治療研究奠定基礎(chǔ)。 2.鑒于低能量激光改善微循環(huán)、提高免疫功能和抗氧化能力等作用，在模型建立成功的基礎(chǔ)上，觀察低能量激光照射對(duì)子癇前期大鼠模型的治療作用及器官組織的病理改變。

7、 方法: 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 建立模型時(shí)40只雌性成年SD大鼠，體重200-250克，20只雄性成年SD大鼠，體重250-300克。隨機(jī)選擇20只雌性大鼠分別與20只雄性大鼠1：1共籠，次日清晨觀察陰栓若未見陰栓取陰道分泌物檢查，發(fā)現(xiàn)陰栓或精子為妊娠第0天，剩余20只雌性大鼠不作受孕處理為對(duì)照組。激光照射時(shí)選用SD孕鼠40只，受孕及飼養(yǎng)條件與建模時(shí)一樣。 2.動(dòng)物分組及建立模型 將40只大鼠分為四組，分別

8、為：非孕注射生理鹽水組（nonpregnancy saline group，NS）、受孕注射生理鹽水組pregnancy saline group，PS）、非孕注射內(nèi)毒素組（nonpregnancy endotoxin group，NE）和受孕注射內(nèi)毒素組（pregnancy endotoxin group，PE），每組10只。PS組及PE組在妊娠14d沿鼠尾靜脈分別注射生理鹽水及內(nèi)毒素（按1.0μg/kg注射，濃度0.1μg/ml），

9、NS組及NE組在同一天做對(duì)應(yīng)處理。 3.子癇前期大鼠模型的標(biāo)準(zhǔn) 查閱目前的文獻(xiàn)報(bào)道，通常選用血壓、尿蛋白及仔鼠和胎盤情況來(lái)確定模型是否成功，但是各指標(biāo)的具體數(shù)值還沒有公認(rèn)的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)檫x擇實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物種類及測(cè)量?jī)x器的不同，指標(biāo)的基礎(chǔ)值也有很大的差異，均是通過(guò)設(shè)置對(duì)照組從而比較組間上述指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義來(lái)定義子癇前期模型。 4.低能量激光照射治療 我們?cè)谀Ｐ统晒Φ幕A(chǔ)上進(jìn)一步運(yùn)用激光照射并觀察其療效。40

10、只孕鼠平均分為四組：生理鹽水組、生理鹽水照射組、內(nèi)毒素組和實(shí)驗(yàn)組，內(nèi)毒素組和實(shí)驗(yàn)組妊娠14天與建模部分一樣注射內(nèi)毒素，生理鹽水組和生理鹽水照射組注射生理鹽水，且實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水照射組妊娠16天開始激光照射，每天一次，一次30min，直到妊娠19天。 5.監(jiān)測(cè)指標(biāo) 妊娠第13、15、17、19天測(cè)量鼠尾動(dòng)脈收縮壓（systolic blood pressure，SBP），妊娠第11、15、19天收集24h尿液測(cè)量蛋白含量，

11、妊娠第7、20天尾靜脈抽血測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）及TNF-α值，妊娠第20天處死大鼠取肝、腎、肺、心、腦及孕鼠胎盤組織做病理切片，同時(shí)計(jì)數(shù)仔鼠數(shù)量和體重及胎盤濕重。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，每組不同時(shí)間點(diǎn)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析（ANOVA for repeated measurement），分組因素的單獨(dú)效應(yīng)

12、分析采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析（One-way for ANOVA），多重比較滿足方差齊性檢驗(yàn)時(shí)采用Bonferroni法，不滿足方差齊性檢驗(yàn)時(shí)采用Dunnett'sT3法，仔鼠數(shù)量用非參數(shù)檢驗(yàn)，以P≦0.05（雙側(cè)）表示統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。 結(jié)論: 1.妊娠中期單次低劑量?jī)?nèi)毒素尾靜脈注射可以使孕鼠血壓升高、尿蛋白增加、肝腎生化指標(biāo)升高及胎盤和仔鼠重量降低，同子癇前期的臨床癥狀有相似的表現(xiàn)，且與現(xiàn)有的確定子癇前期模

13、型的標(biāo)準(zhǔn)一致，可以認(rèn)為建模成功。 2.在建立模型過(guò)程中，除了確定子癇前期的以上指標(biāo)外，我們還發(fā)現(xiàn)了模型組血清TNF-α升高、肝、腎、肺、心及胎盤組織的形態(tài)學(xué)改變。 3.低能量激光心前區(qū)照射對(duì)子癇前期大鼠模型有治療效果，可拮抗內(nèi)毒素引起的孕鼠血壓升高、尿蛋白增加、肝腎生化指標(biāo)改變及仔鼠的生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，且未發(fā)現(xiàn)對(duì)生理鹽水對(duì)照組孕鼠及仔鼠的損害，證明了低能量激光照射做為物理療法的優(yōu)越性。 4.我們還觀察到低能量激光照射