中耳聽骨的發(fā)育及其與內(nèi)耳的整合作用.pdf

1、本研究采用鵪鶉-雞胚移植法探索咽囊內(nèi)胚層對(duì)中耳聽骨發(fā)育(誘導(dǎo)/成形)及中耳聽骨與內(nèi)耳整合的作用。首先在整體標(biāo)本中觀察了正常雞胚中耳聽骨——耳小柱(columella)發(fā)育過程中的形態(tài)學(xué)改變與特征，建立了正常參照標(biāo)準(zhǔn)。然后，采用鵪鶉-雞胚移植法，研究了菱腦第4節(jié)(R4區(qū))咽囊內(nèi)胚層對(duì)耳小柱的誘導(dǎo)和成形作用、R4R5區(qū)咽囊內(nèi)胚層對(duì)耳小柱和內(nèi)耳(半規(guī)管)包囊的整合作用、以及R4區(qū)咽囊內(nèi)胚層對(duì)R3至中腦(MB)區(qū)其它軟骨的誘導(dǎo)和成形作用，證實(shí)了

2、咽囊內(nèi)胚層能誘導(dǎo)中耳聽骨發(fā)育及中耳聽骨與內(nèi)耳的整合作用，并且確切定位了誘導(dǎo)耳小柱各部位發(fā)育及其與內(nèi)耳整合作用的咽囊內(nèi)胚層組織，從而闡明了中、內(nèi)耳正常胚胎發(fā)育與畸形形成的部分機(jī)制。 第一部分：正常雞胚聽骨發(fā)育中的解剖形態(tài)目的掌握正常雞胚發(fā)育過程中耳小柱解剖形態(tài)與特征，建立正常參照標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)探索在整體標(biāo)本中清晰顯示位置深在的耳小柱的方法。方法收取胚胎發(fā)育第5-19天(E5-E19)雞胚頭部，4％PFA固定，阿辛藍(lán)軟骨染色，甲醛水楊酸

3、軟組織透明后，解剖顯微鏡下觀察中耳腔內(nèi)耳小柱及其周圍軟骨發(fā)育情況，包括方形軟骨、關(guān)節(jié)軟骨、鱗骨、下頜軟骨(Meckel軟骨)、內(nèi)耳(半規(guī)管)包囊以及舌骨。結(jié)果耳小柱約在E7出現(xiàn)，E8-E10呈分離的內(nèi)、外側(cè)2部分，E11已具成熟期形態(tài)(內(nèi)、外側(cè)2部分融為一體，外側(cè)段有3個(gè)突起)，E12形態(tài)更清晰，E13軟組織內(nèi)血管影出現(xiàn)，E14軟骨開始鈣化，E15以后，耳小柱及其周圍所有軟骨形態(tài)已無明顯改變，但標(biāo)本軟組織透明度降低、血管影增多、表皮色素

4、和毛孔形成斑點(diǎn)狀沉積影。耳小柱周圍所有軟骨在E11時(shí)已具備成熟期形態(tài)。阿辛藍(lán)軟骨染色、甲醛水楊酸軟組織透明法能在整體標(biāo)本中清晰顯示位置深在的耳小柱。結(jié)論在耳小柱的誘導(dǎo)與成形及其與內(nèi)耳整合作用的實(shí)驗(yàn)中，E12為最佳收集標(biāo)本時(shí)間，此期耳小柱的正常形態(tài)表現(xiàn)為內(nèi)、外側(cè)2部分融為一體，外側(cè)段有3個(gè)突起。阿辛藍(lán)軟骨染色、甲醛水楊酸軟組織透明法能清晰顯示深部軟骨的形態(tài)、結(jié)構(gòu)。 第二部分：雞胚中耳聽骨的發(fā)育及其與內(nèi)耳的整合作用目的研究咽囊內(nèi)胚層

5、對(duì)中耳聽骨發(fā)育(誘導(dǎo)/成形)及中耳聽骨與內(nèi)耳整合的作用。方法采用鵪鶉-雞胚移植法，右為實(shí)驗(yàn)側(cè)，左為對(duì)照側(cè)，在胚胎早期(HH8-15)將供體鵪鶉胚R4、R4R5區(qū)咽囊內(nèi)胚層分別“同位”移植到受體雞胚、R4區(qū)咽囊內(nèi)胚層“異位”移植到受體R3至中腦區(qū)后，繼續(xù)孵育至E12，收集頭部標(biāo)本。固定、染色、軟組織透明與觀察同第一部分。結(jié)果在“同位”移植后，R4區(qū)咽囊內(nèi)胚層成功誘導(dǎo)了耳小柱的發(fā)育，并隨供體位置的輕度偏移，可誘導(dǎo)耳小柱不同部位的發(fā)育；R4R