應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選MOVC型布加綜合征病人外周血單個(gè)核細(xì)胞相關(guān)基因的研究.pdf

1、研究背景：布加綜合征(Budd Chiari syndrome, BCS)是血管外科的疑難病，也是我國(guó)血管外科的常見(jiàn)病，其自然預(yù)后較差，出現(xiàn)癥狀后的5年生存率很低，非手術(shù)治療死亡率高。因缺乏早期特異性臨床表現(xiàn)和有效的早期檢測(cè)手段，患者就診時(shí)多已屬晚期，嚴(yán)重影響其治療效果，愈后常欠佳，故如何提高BCS的早期診斷率是提高患者生存與預(yù)后的關(guān)鍵問(wèn)題。BCS的病因和發(fā)生機(jī)制尚不明確，目前國(guó)內(nèi)外對(duì) BCS研究主要集中于肝靜脈型，對(duì)下腔靜脈隔膜型（m

2、embranous obstruction of the inferior vena cava, MOVC）的研究較少。本課題以MOVC患者為研究對(duì)象，在國(guó)內(nèi)首次以外周血檢測(cè)作為切入點(diǎn)，應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較MOVC患者與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞的基因表達(dá)，篩選出患者與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞的差異基因表達(dá)譜，旨在較全面了解MOVC疾病過(guò)程中基因的表達(dá)情況，深入研究其相關(guān)基因的生物功能，以期能發(fā)現(xiàn)早期診斷MOVC和判斷其預(yù)后的標(biāo)志基因，并為發(fā)

3、現(xiàn)早期篩查的血液標(biāo)志物做初步探討。
　　研究目的：本文利用Affymetrix公司的基因表達(dá)譜芯片對(duì)MOVC患者和正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)譜進(jìn)行研究，篩選MOVC相關(guān)基因，并對(duì)這些基因的功能進(jìn)行初步的分析，為MOVC的臨床診斷和治療提供新的途徑。
　　研究方法患病組和正常對(duì)照組各3例。將每個(gè)血液樣本單獨(dú)抽提總 RNA，鑒定其質(zhì)量，純化后使用生物素標(biāo)記，制成 RNA探針，通過(guò)與包括全轉(zhuǎn)錄本的Affymetrix Human

4、 Gene1.0 ST Array表達(dá)譜芯片雜交，雜交后的芯片用激光掃描儀進(jìn)行掃描，經(jīng)過(guò)信號(hào)檢測(cè)、微陣列圖像分析、計(jì)算機(jī)軟件數(shù)據(jù)處理，將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，得出兩組基因的表達(dá)信息，用t檢驗(yàn)篩選患者外周血和正常對(duì)照組外周血單核細(xì)胞的差異表達(dá)基因(以P<0.05為條件)，根據(jù) Gene Ontology對(duì)所篩選的部分差異基因進(jìn)行功能分析。
　　研究結(jié)果：經(jīng)過(guò)分析，以p<0.05作為標(biāo)準(zhǔn)，得到1，609個(gè)差異表達(dá)的基因。以p<0.05且

5、Fold change值>2為標(biāo)準(zhǔn)，得到100個(gè)顯著差異基因，其中有54(54％)差異表達(dá)基因?yàn)樯险{(diào)基因，46(46%)基因?yàn)橄抡{(diào)基因。以p<0.01作為標(biāo)準(zhǔn)，得到303個(gè)差異表達(dá)的基因。以p<0.01且Fold change值>2為標(biāo)準(zhǔn)，得到25個(gè)極顯著差異基因，其中有8個(gè)（32%)差異表達(dá)基因?yàn)樯险{(diào)基因，17個(gè)（68%)基因?yàn)橄抡{(diào)基因。在對(duì)極顯著差異基因進(jìn)行功能分析時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)有13個(gè)差異基因無(wú)功能注釋?zhuān)仓饕嬖谟诒磉_(dá)下調(diào)的基因中

6、，表達(dá)上調(diào)的8個(gè)基因部分有功能注釋?zhuān)饕婕懊庖?，?xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),炎癥反應(yīng)，凝血，血管生成抑制，細(xì)胞周期相關(guān)等方面，功能亦十分復(fù)雜。
　　研究結(jié)論：應(yīng)用基因芯片技術(shù)能篩選出MOVC型BCS和正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞差異表達(dá)的基因，并能探討部分差異基因的生物功能。從基因角度研究 MOVC，為進(jìn)一步深入研究布加綜合征的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)并奠定分子生物學(xué)基礎(chǔ)。這些差異基因可能有助于發(fā)現(xiàn)MOVC早期篩查的血液標(biāo)志物的研究?；蛐酒夹g(shù)作為一種新