應用基因表達譜芯片篩選MOVC型布加綜合征病人外周血單個核細胞相關基因的研究.pdf

1、研究背景：布加綜合征(Budd Chiari syndrome, BCS)是血管外科的疑難病，也是我國血管外科的常見病，其自然預后較差，出現(xiàn)癥狀后的5年生存率很低，非手術治療死亡率高。因缺乏早期特異性臨床表現(xiàn)和有效的早期檢測手段，患者就診時多已屬晚期，嚴重影響其治療效果，愈后常欠佳，故如何提高BCS的早期診斷率是提高患者生存與預后的關鍵問題。BCS的病因和發(fā)生機制尚不明確，目前國內(nèi)外對 BCS研究主要集中于肝靜脈型，對下腔靜脈隔膜型（m

2、embranous obstruction of the inferior vena cava, MOVC）的研究較少。本課題以MOVC患者為研究對象，在國內(nèi)首次以外周血檢測作為切入點，應用基因芯片技術比較MOVC患者與正常人外周血單個核細胞的基因表達，篩選出患者與正常人外周血單個核細胞的差異基因表達譜，旨在較全面了解MOVC疾病過程中基因的表達情況，深入研究其相關基因的生物功能，以期能發(fā)現(xiàn)早期診斷MOVC和判斷其預后的標志基因，并為發(fā)

3、現(xiàn)早期篩查的血液標志物做初步探討。
　　研究目的：本文利用Affymetrix公司的基因表達譜芯片對MOVC患者和正常人外周血單個核細胞的表達譜進行研究，篩選MOVC相關基因，并對這些基因的功能進行初步的分析，為MOVC的臨床診斷和治療提供新的途徑。
　　研究方法患病組和正常對照組各3例。將每個血液樣本單獨抽提總 RNA，鑒定其質量，純化后使用生物素標記，制成 RNA探針，通過與包括全轉錄本的Affymetrix Human

4、 Gene1.0 ST Array表達譜芯片雜交，雜交后的芯片用激光掃描儀進行掃描，經(jīng)過信號檢測、微陣列圖像分析、計算機軟件數(shù)據(jù)處理，將所得的數(shù)據(jù)進行比較，得出兩組基因的表達信息，用t檢驗篩選患者外周血和正常對照組外周血單核細胞的差異表達基因(以P<0.05為條件)，根據(jù) Gene Ontology對所篩選的部分差異基因進行功能分析。
　　研究結果：經(jīng)過分析，以p<0.05作為標準，得到1，609個差異表達的基因。以p<0.05且

5、Fold change值>2為標準，得到100個顯著差異基因，其中有54(54％)差異表達基因為上調(diào)基因，46(46%)基因為下調(diào)基因。以p<0.01作為標準，得到303個差異表達的基因。以p<0.01且Fold change值>2為標準，得到25個極顯著差異基因，其中有8個（32%)差異表達基因為上調(diào)基因，17個（68%)基因為下調(diào)基因。在對極顯著差異基因進行功能分析時，我們發(fā)現(xiàn)有13個差異基因無功能注釋，也主要存在于表達下調(diào)的基因中

6、，表達上調(diào)的8個基因部分有功能注釋，主要涉及免疫，細胞信號轉導,炎癥反應，凝血，血管生成抑制，細胞周期相關等方面，功能亦十分復雜。
　　研究結論：應用基因芯片技術能篩選出MOVC型BCS和正常人外周血單個核細胞差異表達的基因，并能探討部分差異基因的生物功能。從基因角度研究 MOVC，為進一步深入研究布加綜合征的發(fā)病機制提供依據(jù)并奠定分子生物學基礎。這些差異基因可能有助于發(fā)現(xiàn)MOVC早期篩查的血液標志物的研究?；蛐酒夹g作為一種新