MMP-1在牙根吸收發(fā)生機(jī)制中的作用及其調(diào)控的初步研究.pdf

1、金屬基質(zhì)蛋白酶-1（matrixmetalloproteinases-1,MMP-1）作為金屬蛋白激酶家族中一員能在正畸力作用下啟動(dòng)膠原纖維分解斷裂這一過程,以達(dá)到清除牙周膜（PeriodontalLigament，PDL）中膠原纖維的目的，而這一過程無論對于正畸過程中牙槽骨的吸收、改建，還是牙根吸收發(fā)生都是重要機(jī)制環(huán)節(jié)。在機(jī)械力介導(dǎo)下的正畸過程中，牙周膜成纖維細(xì)胞（HPDLF）的作用是非?；钴S的，具有分泌等多種潛能，與牙槽骨的改建等活

2、動(dòng)密切相關(guān)。那么，HPDL是否具有分泌MMP-1功能，這種分泌功能的調(diào)節(jié)機(jī)制如何？基于研究正畸過程中牙根吸收的發(fā)生機(jī)制和防治策略的需要，本研究針對上述問題從以下三個(gè)方面進(jìn)行了初步研究。
　　1.MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)
　　目的：在基因和蛋白水平上檢測體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞（humanperiodontalligamentfibroblast，HPDLF）對金屬基質(zhì)蛋白酶-1（matrixmet

3、alloproteinases-1,MMP-1）的表達(dá)情況。方法：收集4-6代體外培養(yǎng)的HPDL細(xì)胞，用逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測定MMP-1的蛋白含量和mRNA表達(dá)量；2.取細(xì)胞外液用免疫印跡法（Westernblot）方法檢測MMP-1蛋白表達(dá)。結(jié)果：RT-PCR結(jié)果和Westernblot結(jié)果均證明：在HPDLFs中，MMP-1的蛋白和基因上均有表達(dá)。結(jié)論：體外培養(yǎng)的PDL具有分泌MMP-1的功能。
　　2.牙

4、根吸收相關(guān)因子對MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞中的表達(dá)的影響
　　目的：探討牙根吸收相關(guān)因子，如腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactor,TNF-α)白介素-6(IL-6)對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞產(chǎn)生MMP-1的影響,從而分析MMP-1在牙根吸收機(jī)制中的作用。方法：采用免疫印跡法和逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)分別檢測體外培養(yǎng)的HPDLFs經(jīng)0ng/ml(對照組)、0.01ng/ml、0.02ng/ml、0.03n

5、g/ml、0.04ng/mlTNF-α處理12h；經(jīng)0ng/ml(對照組)；0.02ng/ml；0.04ng/ml；0.06ng/ml；0.08ng/mlIL-6處理24h后,細(xì)胞產(chǎn)生MMP-1的蛋白含量和mRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果：運(yùn)用免疫印跡法和逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)研究均發(fā)現(xiàn)經(jīng)不同濃度的TNF-α和IL-6處理的細(xì)胞在mRNA和上清液中活性蛋白水平均能增加MMP-1的表達(dá)。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組MMP-1的表達(dá)量均隨刺激因子的濃度增高而逐步升

6、高，直至到達(dá)頂峰之后，又隨著濃度增加呈現(xiàn)下降趨勢。結(jié)論：適量TNF-α、IL-6可以促進(jìn)HPDLF分泌MMP-1，提示HPDLF中MMP-1表達(dá)增加可能是牙根吸收發(fā)生的生物學(xué)機(jī)制之一。
　　3.中藥天花粉蛋白(TCS)對牙根吸收相關(guān)因子介導(dǎo)的MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞中過表達(dá)的影響
　　目的：探討中藥天花粉蛋白（TCS）對牙根吸收相關(guān)因子介導(dǎo)的MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞中過表達(dá)的影響，以期能夠基于這種物質(zhì)建立

7、以一種抑制正畸過程中牙根吸收的生物學(xué)治療途徑。方法：對HPDLF進(jìn)行體外培養(yǎng),分成A，B，C，D，E五組：A組；空白對照組；B組：只加入刺激因子TNF-α(濃度為0.03ng/ml)；C組：加入刺激因子TNF-α+TCS（TNF-α濃度為0.03ng/ml；TCS濃度為0.03ng/ml）；D組：只加入刺激因子IL-6（濃度為0.06ng/ml）；E組：加入刺激因子IL-6+TCS（IL-6濃度為0.06ng/ml；TCS濃度為0.05

8、ng/ml）對HPDL分別進(jìn)行刺激，24h后分別應(yīng)用免疫印跡法和逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)測定上述五個(gè)實(shí)驗(yàn)組中MMP-1的蛋白含量和mRNA表達(dá)量。后用流式細(xì)胞儀對經(jīng)過TCS（濃度為0.05ng/ml）處理后的細(xì)胞與對照細(xì)胞進(jìn)行測定，分析比較TCS對人牙周膜細(xì)胞生長狀態(tài)的影響。結(jié)果：結(jié)合TCS作用，可使TNF-α及IL-6介導(dǎo)的MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞中過表達(dá)作用受到抑制。結(jié)論：TCS可以抑制HPDLF在牙根吸收相關(guān)因子作用下出現(xiàn)