PLGA-HA-PVA復(fù)合材料對hBMSCs向軟骨分化的體外實驗研究.pdf

1、目的:
　　探索hBMSCs接種于不同配比PLGA-HA-PVA復(fù)合三維支架材料上干細(xì)胞的分化情況。
　　方法:
　　制備PVA質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為15wt％、10wt％、5wt％PLGA-HA-PVA復(fù)合三維支架材料，其中PLGA為30wt％，HA為5wt％。支架上接種密度為1×106/mlhBMSCs的第3代傳代細(xì)胞。將上述材料分為誘導(dǎo)組及非誘導(dǎo)組(n=5)，根據(jù)分組分別加上hBMSCs軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液或普通hBMSCs培

2、養(yǎng)液，并給每組設(shè)立空白對照組（含干細(xì)胞及培養(yǎng)液）。每3d換液一次，觀察支架周圍細(xì)胞生長情況，回收培養(yǎng)后7d、14d、21d時培養(yǎng)液行ELISA定量檢測Ⅱ型膠原及糖胺聚糖，培養(yǎng)21d后取復(fù)合材料行HE染色、免疫組化定性檢測Ⅱ型膠原。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:
　　hBMSCs生長狀況良好，細(xì)胞貼壁，紡錘形或多角。在培養(yǎng)后21天復(fù)合物HE染色示誘導(dǎo)組有細(xì)胞外基質(zhì)的分泌，Ⅱ型膠原免疫組化結(jié)果顯示誘

3、導(dǎo)組存在棕黃色顆粒;非誘導(dǎo)組HE染色未見明顯細(xì)胞外基質(zhì)分泌，免疫組化示無明顯棕黃色顆粒，表示誘導(dǎo)組有Ⅱ型膠原表達(dá)。誘導(dǎo)組培養(yǎng)液中Ⅱ型膠原及糖胺聚糖的含量在PVA濃度為15wt％最高，PVA濃度為10wt％次之，PVA濃度為5wt％及空白對照組最低，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。非誘導(dǎo)組及非誘導(dǎo)空白對照組培養(yǎng)液中未測及Ⅱ型膠原及糖胺聚糖成分。
　　結(jié)論:
　　PVA濃度為15wt％或10wt％的PLGA-PVA-HA三維