甘草次酸類及甘草查爾酮類化合物對人肝癌Bel-7402細(xì)胞的抗癌活性及其機制的研究.pdf

1、目的：篩選甘草次酸類及甘草查爾酮類化合物抗癌活性較高的活性單體，考察甘草次酸類及甘草查爾酮類化合物對體外培養(yǎng)的正常肝細(xì)胞（Chang liver）及人肝癌細(xì)胞（Bel-7402）生長活力、凋亡作用及凋亡時間以及相關(guān)基因（p53、Bax、bcl-2）表達調(diào)控，揭示甘草次酸類及甘草查爾酮類對Bel-7402細(xì)胞的抗癌活性及促凋亡作用的機制。
　　方法：本研究將正常肝細(xì)胞（Chang liver）和人肝癌細(xì)胞（Bel-7402）作為體外

2、模型。利用MTT比色法篩選甘草中的三萜類和查爾酮類有效成分及其半合成衍生物的有效劑量，包括對正常肝細(xì)胞毒性及對肝癌細(xì)胞的抑制作用。進一步應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)考察藥物對肝癌細(xì)胞（Bel-7402）的促凋亡作用和凋亡時周期情況。最后應(yīng)用 Western Blot蛋白質(zhì)印跡法考察藥物對相關(guān)基因（p53、Bax、bcl-2）的表達調(diào)控。
　　結(jié)果：1.甘草黃酮類中，甘草總黃酮A、甘草總黃酮B及光甘草定對Chang liver細(xì)胞抑制作用不明

3、顯；在5-500μg/ml范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，三種提取物對Bel-7402細(xì)胞生長抑制率逐漸增加，且單體光甘草定的抑制作用最強。2.甘草次酸類化合物中，18α-甘草次酸(18α-GA)、18β-甘草次酸(18β-GA)、甘草次酸-5氟尿嘧啶復(fù)合物（GA-5FU）對正常肝細(xì)胞Chang liver、肝癌Bel-7402細(xì)胞均有抑制作用，但對chang liver細(xì)胞抑制作用不太明顯。在5-320μmol/l范圍內(nèi)對肝癌Bel-74

4、02細(xì)胞抑制率隨濃度升高而逐漸升高，在80-160μmol/l濃度下，GA-5FU、5FU對Bel-7402細(xì)胞凋亡率分別是57％-59.1%、16.7%-20.1%。3.甘草查爾酮類化合物中，異甘草素（ILG）、3-甲氧基異甘草素（3-MO-ILG）、3-羥基異甘草素(3-0H-ILG)在5-320μmol/l范圍內(nèi)對Bel-7402細(xì)胞和Chang liver細(xì)胞抑制率隨濃度升高而逐漸升高，其中ILG、3-MO-ILG對肝癌Bel-

5、7402細(xì)胞抑制率最為明顯（最高抑制率分別達63%及89%），采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測，在40-160μmol/l濃度下，促凋亡率分別為10.6%-79%及10.1%-93.7%。ILG和3-MO-ILG在IC50濃度時是通過阻滯G2/M期促進細(xì)胞凋亡。采用Western Blot法檢測，發(fā)現(xiàn)3-MO-ILG促Bel-7402細(xì)胞凋亡是通過上調(diào)p53和Bax，下調(diào)bcl-2通路來完成。
　　結(jié)論：1.甘草黃酮類中，甘草總黃酮A、甘草

6、總黃酮B及光甘草定對正常肝細(xì)胞Chang liver毒性低，而對肝癌Bel-7402細(xì)胞表現(xiàn)出較強的抑制增殖的作用，其中單體光甘草定對Bel-7402細(xì)胞抑制率最明顯。2.甘草次酸類化合物中，18α-GA、GA-5FU對Bel-7402表現(xiàn)出較好的抑制活性，對癌細(xì)胞促凋亡的同時，對正常肝細(xì)胞 Chang liver無明顯毒性作用。3.甘草查爾酮類化合物中，3-甲氧基異甘草素對肝癌 Bel-7402細(xì)胞顯示出顯著的促凋亡作用，而對正常肝細(xì)