轉(zhuǎn)CpTI水稻中hpt基因在大鼠體內(nèi)代謝及安全性的初步研究.pdf

1、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)CpTI水稻中hpt基因在大鼠體內(nèi)代謝及安全性的初步研究姓名：殷召雪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：衛(wèi)生毒理學(xué)指導(dǎo)教師：徐海濱20050701中國(guó)疾病預(yù)防控制中心碩士論文普通飼料、大豆和玉米基因組DNA，提取胃和空腸內(nèi)容物DNA時(shí)采用了鹽酸胍裂解與WizardDNACleanupsystem純化相結(jié)合的方法，提取回腸下段、盲腸、直腸內(nèi)容物時(shí)采用了效果更好的QlAampDNAStoolMiniKit來(lái)提取。本研究

2、對(duì)PCR擴(kuò)增體系作了優(yōu)化，使其盡可能有效擴(kuò)增。研究結(jié)果：1外源基因hpt在消化道不同部位的降解情況不同，胃、空腸內(nèi)容物中可檢測(cè)到hpt，在回腸下段、盲腸、直腸內(nèi)容物均檢測(cè)不到。2利用不同大小擴(kuò)增片段的嵌套式引物(Y04，Y10，Y11)來(lái)研究hpt降解的長(zhǎng)度依賴性(1ength—dependent)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在消化道中同一部位中，長(zhǎng)度較小的片段(Y04)更容易檢測(cè)到，長(zhǎng)度較大的片段(V11)則不易檢測(cè)到。3利用不同位置擴(kuò)增片段的引物(Y

3、02，Y03，Y04)來(lái)研究hpt降解是否與位置相關(guān)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在同一消化道部位中，位于hpt中間的片段(Y03)不易降解，而位于hpt兩段hpt與大米基因組連接處)的片段較容易降解。4hpt片段在消化道同一部位不同時(shí)間點(diǎn)的降解程度不同，hpt的降解與其受作用時(shí)間有較大關(guān)系，受作用時(shí)間越長(zhǎng)，其被降解的越徹底，在喂飼大鼠飼料后2，4，6，8h后在胃、空腸內(nèi)容物中可檢測(cè)到hpt，而10h后則檢測(cè)不到。5肝、腎中未發(fā)現(xiàn)外源hpt基因片段存在。6

4、普通生長(zhǎng)維持飼料與大米飼料中內(nèi)源性葉綠體基因片段(編碼tRNALeu)在消化道中降解可能有所差異，前者在消化道中降解之后在所有部位中均可檢測(cè)到基因片段，后者在消化道中降解之后在下部消化道中檢測(cè)到的幾率較低。結(jié)論：1提出了更高效提取飼料和消化道內(nèi)容物DNA的方法，為相關(guān)研究搭建了技術(shù)平臺(tái)。2首次獲得外源基因hpt在消化道中降解的特點(diǎn)：隨時(shí)間延長(zhǎng)hpt降解的程度變大，而且較長(zhǎng)的片段更容易降解；hpt不同位置相應(yīng)片段被降解的幾率不同，位于中間