卵泡抑制素基因疫苗pXAIS在小鼠體內(nèi)的分布及安全性研究.pdf

1、pXAIS是由本實(shí)驗(yàn)室所構(gòu)建的一種用于提高動(dòng)物繁殖能力的卵泡抑制素基因疫苗，通過(guò)平衡致死系統(tǒng)減毒沙門(mén)氏菌C500所呈遞的一種核酸疫苗。分析基因疫苗在體內(nèi)的分布規(guī)律和安全性，對(duì)于提高基因疫苗的效果、促進(jìn)其臨床應(yīng)用具有十分重要的作用。本研究從活菌分布及基因整合、疫苗體內(nèi)分布及組織病理學(xué)變化等方面評(píng)價(jià)基因疫苗pXAIS的安全性，為pXAIS盡快的進(jìn)入實(shí)踐應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。主要研究如下：
　　 1．活菌分布及血液毒性測(cè)定

2、r>　　 100只37日齡的雌性小鼠隨機(jī)分為四組：（1）實(shí)驗(yàn)組：小鼠灌胃免疫pXAIS疫苗200μL用最高劑量（2×1010CFU/ml）進(jìn)行免疫。（2）C500對(duì)照組：小鼠灌胃空菌200gL，用最高劑量（2×1010CFU/ml）。（3）PBS對(duì)照組：灌胃注射PBS200μl。
　　 （4）空白對(duì)照組：無(wú)任何處理。只免疫一次。從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到進(jìn)行免疫后14天內(nèi)對(duì)小鼠進(jìn)行觀(guān)察，檢測(cè)免疫后不同時(shí)間載體活菌在小鼠體內(nèi)的分布，并進(jìn)行血液

3、毒性檢測(cè)包括血液生化學(xué)指標(biāo)和血液生理學(xué)指標(biāo)。
　　 結(jié)果表明小鼠體重、食量及糞便與對(duì)照組之間未見(jiàn)明顯改變。在8h未檢測(cè)到活菌，在1-4d能陸續(xù)在各組織檢測(cè)到活菌，5d時(shí)在除卵巢外的其他組織都能檢測(cè)到活菌，然后活菌數(shù)逐漸下降，14d便檢測(cè)不到。血液生理學(xué)指標(biāo)白細(xì)胞在免疫后一周內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組有差異，而且在免疫后7d，與所有對(duì)照組差異顯著（P<0.05），其他血液學(xué)及臨床生化指標(biāo)均屬正常范圍內(nèi)波動(dòng)，未發(fā)現(xiàn)與該疫苗相關(guān)的毒性反應(yīng)。<

4、br>　　 2．基因整合、疫苗體內(nèi)分布及組織病理學(xué)觀(guān)察
　　 用200只30日齡的雌性昆明母鼠隨機(jī)分為兩個(gè)對(duì)照組和三個(gè)不同劑量的實(shí)驗(yàn)組。分別用三個(gè)劑量組的DNA疫苗（2×108CFU/ml、2×109CFU/ml、2×1010CFU/ml），免疫小鼠，以PBS和C500作為對(duì)照，共免疫三次，免疫間隔為2周。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程對(duì)小鼠進(jìn)行臨床觀(guān)察，進(jìn)行母鼠組織病理學(xué)變化的檢測(cè)及重量變化，并對(duì)疫苗在體內(nèi)的整合和分布情況進(jìn)行檢測(cè)。
　

5、　 結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)期間，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組動(dòng)物活動(dòng)，精神狀態(tài)，尿及糞便性狀未見(jiàn)明顯差異。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的內(nèi)臟重量也沒(méi)有顯著性差異。組織病理觀(guān)察結(jié)果顯示，受試動(dòng)物在二免和三免的高劑量組免疫后出現(xiàn)有的肝臟損傷，但對(duì)照組有的也出現(xiàn)此情況，表明損傷與疫苗沒(méi)有構(gòu)成依賴(lài)關(guān)系。應(yīng)用PCR和瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行基因隨機(jī)整合檢測(cè)，其結(jié)果表明母鼠和仔鼠基因組DNA中并未發(fā)現(xiàn)整合現(xiàn)象。表明該疫苗發(fā)生整合的可能性很低，本實(shí)驗(yàn)室所構(gòu)建的pXAIS基因疫苗具有較高的