轉Ebf合成酶基因水稻對水稻害蟲趨避性的研究.pdf

1、華中農業(yè)大學碩士學位論文轉Ebf合成酶基因水稻對水稻害蟲趨避性的研究姓名：張曦廷申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：林擁軍201105華中農業(yè)大學2 0 1 1 屆碩士研究生學位論文A b s t r a c tA p h i di sa l l i m p o r t a n tp e s ti na g r i c u l t u r a l p r o d u c t i o n ．A p h i d s d a

2、 m a g et h e p l a n t st h r o u g hs e v e r a lw a y s ：a t t a c kt h ep l a n t sd i r e c t l y ；t h eh o n e y d e w s e c r e t e db yt h ea p h i d c a nb r e e dd i s e a s e ；t h em a j o r m e d i u m b e t

3、w e e n t h ep l a n t sa n d t h ep l a n td i s e a s e ．T h e c o n c e p t o fp e s t r e s i s th a s b e e n c h a n g e d , f r o m “k i l l ”i n t h ep a s tt o “c o n t r o l ”n o w ．T h e a i mo f c o n t r o l

4、i s t oc o n t r o lp e s te f f i c i e n tb u tb e n e f i c i a lt oe n v i r o n m e n t a n de c o l o g i c a lb a l a n c e ．S ow es h o u l dt a k e f u l la d v a n t a g e o f t h et r i t r o p h i cs y s t e

5、m i n t e r a c t i o n sa m o n g h o s tc r o p s ，p e s t a n dp r e d a t o rt oc o n t r o lt h ep e s t ．W h e na t t a c k e db yp r e d a t o r so rp a r a s i t o i d s ，a p h i d sp r o d u c e( E ) 一p —f a m e

6、 s e n ew h i c hc a u s e o t h e r a p h i d s i nt h ev i c i n i t y t os t o p f e e d i n ga n d t om o v e a w a y ．W e t r a n s f e r r e dt h e ( E ) - p —f a r n e s e n es y n t h a s ei n t or i c et h r o u

7、 g ht r a n s g e n i ct e c h n i q u e ．T h er i c eC a nr e l e a s ee n d o g e n o u s ( E ) - p - f a m e s e n ei n t oe n v i r o n m e n tt o a l a r m t h ea p l l i d S ．T h i ss t r a t e g yi sg o o d f o r

8、e n v i r o n m e n tp r o t e c t i o n , f o o d s a f e t ya n dp r e d a t o r p r o t e c t i o n ．O u r e x p e r i m e n tl i n k e dt h e ( E ) - p - f a r n e s e n es y n t h a s e ，w h i c hc l o n e df r o mM

9、 e n t h aXp i p e r i t a , o n t ot h ev e c t o rp C A M B I A 13 0 0 s ．A f t e rt r a n s f e r r e dt h eE 1 3 fs y n t h a s eg e n ei n t oZ h o n g h u a11 b y A g r o b a c t e r i u m - m e d i a t e dt r a n

10、s f o r m a t i o n , w ei d e n t i f i e dt h er e s i s t a n c eo ft h et r a n s g e n i cp l a n t s ．T h em a i n r e s u l t s a r e a sf o l l o w s ：1 ．E 1 3 fs y n t h a s cg e n eW a s c a r r i e db yp A r t

11、 7 一E B F So r i g i n a l l y ，a n df i n a l l yl i n k e dt op C A M B I A l 3 0 0 s b yP C R _2 ．T r a n s f e rt h ee x p r e s s i o nv e c t o r , w h i c hc o n t a i nE 1 3 fs y n t h a s eg e n e ，i n t oj a p

12、o n i c ar Z h o n g h u a l 1 b yA g r o b a c t e r i u m - m e d i a t e dt r a n s f o r m a t i o n ．A f t e rs e l e c t i o n , d i f f e r e n t i a t i o na n d r o o t , w eg o t 6 5t r a n s g e n i c y o u n

13、g p l a n t s ．3 ．T h r o u g h P C R , S o u t h e r n b l o t , g e r m i n a t i o n e x p e r i m e n t a n d p h c n o t y p e e x a m i n e ，w eg o t 4 h o m o z y g o u s t r a n s g e n i cf a m i l i e sw i t hs

14、 i n g l ec o p y ．4 ．D e t e c tt h er e p e l l e n to f t h e4 t r a n s g e n i cf a m i l i e st oa p h i d s ．T h e r e s u l ts u g g e s t st h a tt h eE 1 3 f p r o d u c e d b y t r a n s g e n i cr i c eC a n

15、d i s p e r s et h ea p h i d s ．5 ．D e t e c tt h e r e p e l l e n to ft h e4t r a n s g e n i c f a m i l i e s t o r i c e b r o w np l a n t h o p p e r st h r o u g h o l f a c t o m e t e r o s p h r e s i o m e t

16、 e ro fY t y p e ．T h e r e a l en os i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e sb e t w e e n t r a n s g e n i ca n d n o n - t r a n s g c n i c d e e o n r i c eb r o w n p l a n t h o p p e r s ．6 ．D e t e c tt h e r

17、e p e l l e n to ft h e 4t r a n s g e n i c f a m i l i e s t or i c e s t e m b o r e r s t h r o u g ho l f a c t o m e t e ro s p h r e s i o m e t e ro fY t y p e ．T h e r ea r e n os i g n i f i c a n td i f f e r

18、e n c e sb e t w e e nt r a n s g e n i ca n d n o n - t r a n s g e n i cr i c eo n r i c es t e mb o r e r s ．K e y w o r d s ：a p h i d ；E 1 3 f ；E 1 3 f s y n t h a s e ；r i c eb r o w n p l a n t h o p p e r ；r i c