基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制因子-1在肺間質(zhì)纖維化中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該文探討能否通過(guò)抑制TIMP-1的產(chǎn)生來(lái)阻斷或減少對(duì)MMPS的抑制作用,達(dá)到降解過(guò)多堆只的ECM的目的的可能性,為臨床肺間質(zhì)纖維化的逆轉(zhuǎn)治療提供新的思路和方法.1、以博萊霉素誘導(dǎo)的腫間質(zhì)纖維化大鼠為模型,探討MMP-2、9和TIMP-1在肺間質(zhì)纖維化發(fā)病中的作用.2、用ECORI將人TIMP-ICDNA全長(zhǎng)從重組載體PCR2.1-TIMP-1中切下,T<,4>DNA連接酶將TIMP-1CDNA雙向連接入PLXIND載體中,并轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)

2、菌H<,5>,將抗性克隆,用HINDIII和BSTX1雙酶切鑒定TIMP-1的插入方向,獲得PTS和PTAS,將PTS和PTAS包裝到PA317細(xì)胞,收到上請(qǐng),用0.45um的濾器濾過(guò),儲(chǔ)存?zhèn)溆?3、將表達(dá)timp-1正義和反義rna的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入小鼠成纖維細(xì)胞nih3t3細(xì)胞系,并獲得穩(wěn)定表達(dá)正義和反義timp-1RNA細(xì)胞系,研究了正義和反義TIMP-1核酸對(duì)成纖維細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.總之,該研究發(fā)現(xiàn)1、MMP-2、MMP-

3、9、TIMP-1在中均表達(dá),表明MMP-2、MMP-9、TIMP-1參與與正常肺組織ECM代謝.2、在肺間質(zhì)纖維化模型大鼠MMP-2MRNA早期表達(dá)增高、后期表達(dá)下降,TIMP-1MRNA在全過(guò)程持續(xù)高表達(dá).提示細(xì)胞外基質(zhì)積累可能與MMP-2后期表達(dá)降低以及TIMP-1持續(xù)高表達(dá)抑制MMP-2或其它MMPS的活性有關(guān).3、反義TIMP-1核酸對(duì)MMPS和細(xì)胞外基質(zhì)的表達(dá)并未產(chǎn)生直接的影響,但能抑制NIH3T3細(xì)胞的增殖及內(nèi)源TIMP-1