蒸汽處理對(duì)純化大豆抗原的含量及免疫原性的影響.pdf

1、本試驗(yàn)通過(guò)免疫學(xué)試驗(yàn)研究了蒸汽處理前后的純化大豆抗原的免疫學(xué)特性，找出了大豆中導(dǎo)致動(dòng)物致敏反應(yīng)的主要的抗原物質(zhì)。利用免疫學(xué)方法從蒸汽處理前后的大豆中分離提純出大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白，通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳和SDS-PAGE進(jìn)行分析鑒定。將經(jīng)過(guò)鑒定后的純化抗原皮下注射給18～22g的昆明小鼠，利用瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)所得抗血清與原有抗原是否發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。通過(guò)對(duì)小鼠血清中大豆抗原特異性抗體IgG滴度的測(cè)定，定量檢測(cè)其在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生特

2、異性抗體的程度。 本試驗(yàn)利用免疫學(xué)方法分別從生、熟(120℃，7'30")大豆中分離純化大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白，經(jīng)瓊脂糖CL-6B凝膠層析后，分別得到純化的大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白及其相鄰餾分，依次稱為生大豆11S組分一峰和二峰，生大豆7S組分一峰和二峰，熟大豆11S組分一峰和二峰，熟大豆7S組分一峰和二峰。經(jīng)電泳鑒定后可知，生大豆11S二峰和7S一峰分別為大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白，它們是大豆中存在的兩種主要抗原物

3、質(zhì)。 提純曲線結(jié)果表明，生豆粉經(jīng)過(guò)蒸汽處理后，大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的含量均有所下降，說(shuō)明熱處理可在一定程度上破壞大豆的抗原物質(zhì)。處理后大豆球蛋白的含量明顯減少，而β-伴大豆球蛋白的含量變化不大。經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳可初步確定以上結(jié)論。 SDS-PAGE結(jié)果表明，生大豆主要蛋白質(zhì)成分集中于11S二峰和7S一峰處，熟大豆7S二峰電泳帶與生大豆7S帶相差不大，說(shuō)明熱處理對(duì)其破壞程度較小。 試驗(yàn)中選取45只12

4、～13日齡的昆明小鼠，所有小鼠在斷乳后飼喂不含豆類蛋白的日糧，飼養(yǎng)35日后，體重達(dá)18～22g時(shí)進(jìn)行隨機(jī)分組，將小白鼠隨機(jī)分成9組，每組5只，雌雄隨機(jī)。分別給各組小鼠免疫8種提純抗原，第9組設(shè)為對(duì)照。首次免疫后每隔10日加強(qiáng)免疫一次，加強(qiáng)免疫前隨機(jī)選鼠采血，分離血清，測(cè)定效價(jià)。第四次免疫后第10日腋下采血，分離出血清，以進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和ELISA。 取免疫8種大豆提純抗原所得的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)免疫血清及對(duì)照血清，對(duì)抗原與相應(yīng)血清進(jìn)行瓊

5、脂擴(kuò)散試驗(yàn)，結(jié)果表明，大豆球蛋白的抗血清與β-伴大豆球蛋白無(wú)交叉反應(yīng)；反之，β-伴大豆球蛋白的抗血清與大豆球蛋白亦無(wú)交叉反應(yīng)。生大豆¨S二峰、7S一峰、7S二峰免疫后所得血清與其相應(yīng)抗原發(fā)生反應(yīng)，說(shuō)明動(dòng)物受此種抗原作用后機(jī)體內(nèi)可產(chǎn)生相應(yīng)抗體，發(fā)生免疫應(yīng)答；經(jīng)過(guò)120℃7'30"蒸汽處理后，11S兩峰產(chǎn)物和7S一峰產(chǎn)物免疫后的抗血清與其相應(yīng)抗原不發(fā)生免疫反應(yīng)，而7S二峰即使在處理后仍有反應(yīng)原性，說(shuō)明熱處理不能完全除去7S組分。綜上可知，大