不同佐劑配合ETEC滅活疫苗對蛋雞免疫原性的影響.pdf

1、集約化養(yǎng)殖中，仔豬腹瀉屬常見病癥，腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（enterotoxigenic E.coli，ETEC）是主要病原菌之一，造成的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。卵黃抗體（Eggyolk immunoglobulin，IgY）作為一種抗生素替代品用來控制仔豬腹瀉已有一定的研究基礎(chǔ)，但抗體滴度和產(chǎn)率低限制了IgY的應(yīng)用，免疫佐劑是主要影響因素之一。而常用的弗氏佐劑有一定的毒副作用，免疫原性弱，安全性較差，故尋找高效安全的佐劑來獲得大量的高效價(jià)IgY用于防

2、治ETEC引起的仔豬腹瀉任務(wù)迫切。CpG-ODN（Oligodeoxynucleotide DNA，ODN）是一種高效安全的疫苗佐劑，可以有效提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平。黃芪多糖、殼聚糖作為中藥類免疫佐劑，存在資源廣泛、成本低廉的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景良好。
　　本實(shí)驗(yàn)根據(jù)目前研究中表明的CpG-ODN的免疫活性與其序列結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的關(guān)系，以CpG-ODN2135為模板設(shè)計(jì)了4條不同序列的CpG-ODN。通過體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分別探討了不同序列的

3、CpG-ODN佐劑、殼聚糖、弗氏佐劑及黃芪多糖佐劑對蛋雞細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答方面的影響。應(yīng)用 CCK-8法體外檢測不同佐劑對雞脾臟淋巴細(xì)胞的刺激作用，結(jié)果表明CpG-ODN S2序列的免疫刺激活性最好，刺激指數(shù)可達(dá)3.64。
　　通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)考察不同佐劑配合ETEC滅活疫苗免疫蛋雞后對蛋雞產(chǎn)蛋性能、細(xì)胞免疫及體液免疫的影響。選取來航蛋雞（120日齡）120只，隨機(jī)分為10組，三點(diǎn)注射免疫法分別進(jìn)行3次免疫。第1~2組分別應(yīng)用PBS和

4、ETEC K88滅活全菌疫苗；第3~7組應(yīng)用ETEC K88分別配合不同序列的CpG-ODN S1~S5（30μg/羽）；第8~10組應(yīng)用ETEC K88分別配合弗氏佐劑、殼聚糖佐劑（200 mg/mL）和黃芪多糖佐劑（25 mg/mL）。
　　產(chǎn)蛋率結(jié)果顯示，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間弗氏佐劑組平均產(chǎn)蛋率（71.81%）顯著低于其他組，嚴(yán)重影響蛋雞的產(chǎn)蛋性能。應(yīng)用ELISA法檢測的血清中IL-2及IFN-γ含量、血清抗體效價(jià)、IgY效價(jià)結(jié)果表

5、明，黃芪多糖組初免后可快速激活細(xì)胞因子IL-2（229.64 ng/L）、IFN-γ（28.58 ng/L）；CpG-ODN S2組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間IL-2、IFN-γ的分泌量均較高，強(qiáng)度和持久度最好，對蛋雞細(xì)胞免疫水平的影響明顯優(yōu)于弗氏佐劑（P<0.05）。CpG-ODN S2組血清抗體、IgY效價(jià)最高分別可達(dá)95.00萬、80.00萬，且強(qiáng)度和持久度最好，對蛋雞體液免疫水平的影響明顯優(yōu)于弗氏佐劑（P<0.05）；S1組和S4組IgY效