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文檔簡(jiǎn)介
1、研究背景肺癌是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)惡性腫瘤,其發(fā)病率及死亡率均居惡性腫瘤前列[1,2],導(dǎo)致肺癌高死亡率的重要原因是單純化療或放療不能很好的控制癌癥的發(fā)展。近年來(lái),熱療作為繼手術(shù)、放療、化療、生物治療之后的第五種治療方法引起了人們廣泛的關(guān)注[3],腫瘤熱療有了很大發(fā)展。臨床上常使用熱療配合放化療[4]治療肺癌,但理論研究的滯后嚴(yán)重影響了熱療臨床實(shí)踐的深入。目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)不同病理類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞對(duì)熱療的敏感性差異的研究未見(jiàn)報(bào)道,熱療合用不
2、同化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響及其可能的分子生物學(xué)機(jī)制值得深入研究。長(zhǎng)春瑞濱(NVB)、順鉑(DDP)、吉西他濱(GEM)、多西他賽(TAX)、依托泊苷(VP-16)均為臨床應(yīng)用廣泛的化療藥物,對(duì)肺癌有較好的治療效果,他們與熱療聯(lián)合作用的效果值得進(jìn)一步探討。
目的:以人肺腺癌A549細(xì)胞株和人小細(xì)胞肺癌SBC-5細(xì)胞株為研究對(duì)象,觀(guān)察不同溫度條件下熱療及其與化療藥長(zhǎng)春瑞濱(NVB)、順鉑(DDP)、多西他賽(TAX)、吉西他濱(G
3、EM)、依托泊苷(VP-16)聯(lián)合對(duì)兩細(xì)胞株的作用效果,探討不同病理類(lèi)型的肺癌細(xì)胞株對(duì)熱療的敏感性差異及可能的分子生物學(xué)機(jī)制,并對(duì)熱療與五種化療藥的聯(lián)合作用效果進(jìn)行初步評(píng)價(jià),為肺癌的臨床熱療和熱化療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:1、應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)快速比色法測(cè)定細(xì)胞增殖,確定長(zhǎng)春瑞濱(NVB)、順鉑(DDP)、多西他賽(TAX)、吉西他濱(GEM)、依托泊苷(VP-16)的工作濃度,并以該濃度進(jìn)行化療或與熱療聯(lián)合,計(jì)算24
4、h細(xì)胞生存率,根據(jù)Veleriote法[5]判斷熱化療聯(lián)合24h的作用效果;
2、24h流式細(xì)胞儀檢測(cè)長(zhǎng)春瑞濱與42℃單獨(dú)或聯(lián)合對(duì)A549細(xì)胞株的凋亡和周期的影響情況;
3、24h流式細(xì)胞儀檢測(cè)依托泊苷與42℃單獨(dú)或聯(lián)合對(duì)SBC-5細(xì)胞株的凋亡和周期的影響情況;
4、透射電鏡觀(guān)察依托泊苷與42℃單獨(dú)或聯(lián)合對(duì)SBC-5細(xì)胞株超微結(jié)構(gòu)的變化情況。
結(jié)果:1、單獨(dú)熱療、單獨(dú)化療或熱化療聯(lián)合均對(duì)肺癌細(xì)胞株
5、的生長(zhǎng)有抑制作用,且抑制率隨著熱療溫度的升高、化療藥物濃度的增加而增強(qiáng)(P<0.05),熱化療組抑制率尤為明顯(P<0.01);以24h時(shí)IC10~I(xiàn)C20的藥物濃度作為試驗(yàn)的工作濃度,確定藥物對(duì)兩株細(xì)胞的工作濃度為:NVB1ug/ml,DDP0.1ug/ml,TAX1ug/ml,GEM0.1ug/ml,VP-160.1ug/ml;根據(jù)Veleriote法[5]判斷熱化療聯(lián)合24h的作用效果:NVB、DDP、TAX、GEM、VP-16與
6、熱療聯(lián)合均表現(xiàn)出協(xié)同或次加作用;
2、A549細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)42℃熱療(42℃,1h)降低了S期細(xì)胞所占比例;單獨(dú)化療組(NVB,1ug/ml)使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期;與單獨(dú)化療組(NVB,1ug/ml)相比熱化療組(42℃+NVB,1ug/ml,1h)的S期細(xì)胞所占比例減少,G2/M期細(xì)胞增多;對(duì)照組、熱療組、化療組、熱化療組細(xì)胞凋亡率分別為1.5%、7.9%、13.9%、29.1%;
3、SBC-5細(xì)胞周期
7、分析發(fā)現(xiàn)42℃熱療(42℃,1h)降低了S期細(xì)胞所占比例;單獨(dú)化療組(VP-16,0.1ug/ml)使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期;與單獨(dú)化療組(VP-16,0.1ug/ml)相比熱化療組(42℃+VP-16,0.1ug/ml,1h)的G2/M期細(xì)胞所占比例減少,S期細(xì)胞增多;對(duì)照組、熱療組、化療組、熱化療組細(xì)胞凋亡率分別為3.3%、6.9%、10.3%、21.1%;
4、透射電鏡下見(jiàn)(SBC-5):對(duì)照組細(xì)胞核大,核仁清楚,染色
8、質(zhì)均勻,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)正常,胞膜完整;熱療組(42℃,1h)染色質(zhì)凝集,核膜完整,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)腫脹;化療組(VP-16,0.1ug/ml)細(xì)胞皺縮,胞質(zhì)濃縮,染色質(zhì)聚集于核膜;熱化療組(42℃+VP-16,0.1ug/ml,1h)細(xì)胞碎裂成凋亡小體,胞膜完整,染色質(zhì)不均勻分布于各個(gè)小體內(nèi)。
結(jié)論:1、單獨(dú)熱療與單獨(dú)化療均對(duì)兩株細(xì)胞有抑制作用(P<0.05);
2、SBC-5細(xì)胞株對(duì)熱療、熱化療較A549細(xì)胞株敏感;
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