高溫、化療藥物及免疫制劑聯(lián)合對肺癌細(xì)胞體外作用的研究.pdf

1、研究背景：肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的一種常見腫瘤，發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。肺癌發(fā)現(xiàn)一般較晚，治療效果不理想。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，治療肺癌的方法逐漸增多，近年的主要發(fā)展方向是綜合治療、靶向治療及個(gè)體化治療。雖然人們強(qiáng)調(diào)綜合治療，臨床方面已經(jīng)積累了一定經(jīng)驗(yàn)，但基礎(chǔ)方面研究明顯滯后，影響了臨床綜合治療的發(fā)展。熱療作為一種物理治療手段，不但可以抗腫瘤、緩解癥狀，與其他治療手段聯(lián)合還可以起到增敏作用。非小細(xì)胞肺癌（nonsmall-cell

2、lung cancer,NSCLC）是肺癌最常見的類型，順鉑（cisplatin,DDP）和多西他賽（docetaxel,TXT）是治療NSCLC的藥物，沙培林（sapylin）是國產(chǎn)的注射用A群鏈球菌，為一種免疫制劑，不但可以調(diào)動(dòng)機(jī)體抗腫瘤免疫力，而且對腫瘤細(xì)胞有直接殺傷作用。熱療、化療和免疫治療相結(jié)合的綜合治療方法雖然在臨床有所應(yīng)用，但應(yīng)用的具體方法并不規(guī)范，治療效果也還不夠理想，因此需要進(jìn)行基礎(chǔ)和臨床方面的實(shí)驗(yàn)，尋找更完善的腫瘤綜

3、合治療方法。
　　目的：以人肺腺癌A549細(xì)胞為研究對象，分兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)（24h和48h）觀察不同的溫度與不同濃度的DDP、TXT和沙培林單獨(dú)、兩兩聯(lián)合、四種因素共同作用對細(xì)胞株的影響，探討在細(xì)胞水平熱療聯(lián)合化療及免疫治療的綜合治療方法是否獲益更大及可能的聯(lián)合作用機(jī)制，為臨床綜合治療提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1、應(yīng)用MTT快速比色法檢測不同的溫度與不同濃度的DDP、TXT和沙培林單獨(dú)及兩兩聯(lián)合在24h和48h時(shí)

4、間點(diǎn)對A549細(xì)胞生長抑制作用情況；并根據(jù)Veleriote法判斷高溫聯(lián)合藥物的作用效果；通過兩藥相互作用指數(shù)（CDI）判斷藥物聯(lián)合作用效果；
　　2、流式細(xì)胞儀（FCM）檢測0.005KE/ml沙培林單獨(dú)作用，42°C與2μg/ml DDP、1μg/ml TXT單獨(dú)、兩兩聯(lián)合及三者共同作用,48h時(shí)間點(diǎn)對細(xì)胞凋亡影響情況；
　　3、光學(xué)顯微鏡及熒光顯微鏡觀察正常細(xì)胞、42°C單獨(dú)作用、0.005KE/ml沙培林單獨(dú)作用、4

5、2°C聯(lián)合2μg/ml DDP和1μg/ml TXT共同作用,48h時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1、從細(xì)胞對數(shù)生長期開始24h和48h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測，高溫和三種藥物單用均對A549有生長抑制作用(P<0.05)，藥物有劑量依賴關(guān)系；高溫有溫度依賴關(guān)系；
　　2、從細(xì)胞對數(shù)生長期開始24h和48h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測，高溫與化療藥聯(lián)合組對細(xì)胞生長抑制作用強(qiáng)于單獨(dú)高溫組(P<0.05)；DDP與高溫聯(lián)合為協(xié)同作用；

6、TXT為次加作用。高溫與沙培林聯(lián)合較高溫單獨(dú)作用對細(xì)胞生長抑制作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)；
　　3、從細(xì)胞對數(shù)生長期開始24h和48h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測，DDP和TXT聯(lián)合作用對細(xì)胞生長抑制為協(xié)同作用；DDP和沙培林聯(lián)合也為協(xié)同作用；但TXT和沙培林聯(lián)合無協(xié)同作用；
　　4、從細(xì)胞對數(shù)生長期開始48h時(shí)間點(diǎn)檢測，42°C、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者聯(lián)合凋亡率明顯高于其他處理組（P<0.05）；42°C聯(lián)合D

7、DP或TXT組凋亡率明顯高于42°C組（P<0.05）；0.005KE/ml沙培林作用細(xì)胞凋亡率明顯高于對照組（P<0.05）；
　　5、普通光鏡和熒光顯微鏡下42°C、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者聯(lián)合凋亡細(xì)胞數(shù)較對照組和42°C組明顯增多，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化明顯；0.005KE/ml沙培林組凋亡細(xì)胞數(shù)較對照組明顯增多，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化明顯。
　　結(jié)論：沙培林對A549細(xì)胞有直接的體外抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，與DDP