自然殺傷細(xì)胞聯(lián)合西妥昔單抗對(duì)腸癌細(xì)胞體外作用的研究.pdf

1、目的：通過分別應(yīng)用自然殺傷(natural killer NK）細(xì)胞、西妥昔單抗（cetuximab）以及NK細(xì)胞與cetuximab聯(lián)合對(duì)三株腸癌細(xì)胞（LoVo細(xì)胞、SW480細(xì)胞、SW620細(xì)胞）體外抑制作用的研究，探討cetuximab抗腫瘤過程中抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody dependent cell cytotoxicity，ADCC)的作用。利用NK細(xì)胞表面活化性受體FcγRIII和腫瘤細(xì)胞細(xì)胞表面EG

2、FR(epidermal growth factor receptor）受體表達(dá)為紐帶，為cetuximab聯(lián)合NK細(xì)胞的的細(xì)胞生物治療方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：分別通過免疫組織化學(xué)方法、流式細(xì)胞儀檢測三株不同腸癌細(xì)胞表面的EGFR表達(dá)水平；MTT法分別檢測六種不同濃度cetuximab（5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml）作用24h、48h、72h后三株腫瘤細(xì)胞的

3、生長抑制情況；利用外周血細(xì)胞分離培養(yǎng)NK細(xì)胞，分別將NK細(xì)胞、cetuximab、NK細(xì)胞和cetuximab聯(lián)合作用于三株不同的腫瘤細(xì)胞，采用LDH法檢測三組不同因素處理后三株腫瘤細(xì)胞的抑制率的改變。
　　結(jié)果：免疫組織化學(xué)結(jié)果，EGFR表達(dá)：LoVo(+++),SW480(+),SW620(-)；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果（以平均熒光強(qiáng)度MFI表示）：LoVo MFI55.33±2.78，SW480 MFI26.26±2.24，SW6

4、20 MFI0.97±0.10。cetuximab對(duì)LoVo細(xì)胞和SW480細(xì)胞的抑制率呈正相關(guān)，cetuximab對(duì)SW620細(xì)胞的抑制率無相關(guān)性；NK細(xì)胞按不同效靶比率加入靶細(xì)胞（LoVo細(xì)胞、SW480細(xì)胞、SW620細(xì)胞）后，抑制率均與效靶比呈正相關(guān)，NK細(xì)胞聯(lián)合cetuximab對(duì)LoVo細(xì)胞及SW480細(xì)胞具有協(xié)同抑制效應(yīng)，而NK細(xì)胞聯(lián)合cetuximab對(duì)SW620細(xì)胞具有相加效應(yīng)。
　　結(jié)論：1.cetuximab

5、可抑制EGFR陽性的LoVo細(xì)胞和SW480細(xì)胞，cetuximab的濃度與對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率呈正相關(guān)；而cetuximab對(duì)EGFR陰性的SW620細(xì)胞的抑制不明顯，且cetuximab的濃度與對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率無相關(guān)性；2.NK細(xì)胞聯(lián)合cetuximab對(duì)EGFR表達(dá)的LoVo細(xì)胞、SW480細(xì)胞具有協(xié)同抑制效應(yīng)，且其效應(yīng)與NK細(xì)胞的ADCC功能密切相關(guān)；3.NK介導(dǎo)的ADCC作用受腫瘤細(xì)胞表面的EGFR表達(dá)水平的影響，高EGFR表