草麻黃體外培養(yǎng)及抗旱基因轉(zhuǎn)化.pdf

1、草麻黃作為傳統(tǒng)中藥市場需求量很大，但是干旱和鹽堿嚴(yán)重制約草麻黃的產(chǎn)量，抗旱耐鹽堿草麻黃的研制將對中草藥草麻黃開發(fā)有現(xiàn)實(shí)經(jīng)濟(jì)意義。本研究以草麻黃為試材研究了草麻黃不同外植體、激素配比、基本培養(yǎng)基、pH值、子葉放置方式等對草麻黃愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生的影響，利用基因槍轉(zhuǎn)化將抗旱基因lea3導(dǎo)入麻黃愈傷組織細(xì)胞中，愈傷組織植株再生獲得含抗旱基因lea3再生植株。 草麻黃愈傷組織誘導(dǎo)研究表明，不同外植體來源對愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果不同，子葉和

2、胚軸外植體來源對愈傷組織誘導(dǎo)效果明顯好于胚根來源對愈傷組織誘導(dǎo)效果，三種外植體來源的愈傷組織誘導(dǎo)率分別為65.2％、57.4％和1.2％。培養(yǎng)基組成和激素配比也直接影響愈傷組織生成，最終確定草麻黃愈傷組織最佳誘導(dǎo)條件為MS+2,4-D1.5mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖30mgg/L。在草麻黃愈傷組織懸浮培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+CH250mg/L+YE250mg/L+30g/L蔗糖+5

3、g/L葡萄糖，為細(xì)胞懸浮最佳培養(yǎng)基。通過對草麻黃愈傷組織生長規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織最佳培養(yǎng)基成分為N6+2,4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+30g/L蔗糖，生長旺盛期是在繼代培養(yǎng)后第24-28d，對愈傷組織生長過程中的POD和PPO兩種酶活測定也說明了這一點(diǎn)。草麻黃愈傷組織再生培養(yǎng)中研究了培養(yǎng)基組成、激素、pH值等因素對愈傷組織再生植株的影響，得到適于草麻黃愈傷組織分化的培養(yǎng)基MS+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L

4、+蔗糖30mg/L，pH5.8-6.0，麻黃愈傷組織再生率為15％。 在建立麻黃愈傷組織誘導(dǎo)和再生體系基礎(chǔ)上，利用基因槍法將帶有抗旱耐鹽堿基因lea3的PBY520質(zhì)粒導(dǎo)入麻黃組織細(xì)胞中，經(jīng)過除草劑Bialaphos3次篩選得到具除草劑Bialaphos抗性愈傷組織，Bialsphos抗性愈傷組織得率為12.83％；將Bialsphos抗性愈傷組織置于分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)4周，得到除草劑抗性再生植株7株，再生率為12.5％。通過對試