補(bǔ)肺益腎方調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞治療COPD大鼠的機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察補(bǔ)肺益腎方對慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠外周血和支氣管肺泡灌洗液（BALF）中T淋巴細(xì)胞亞群及肺樹突狀細(xì)胞（DCs）表型的影響，探討其調(diào)節(jié)DCs治療COPD的作用機(jī)制。
　　方法:SPF級SD大鼠共72只隨機(jī)分為六組：對照組、模型組、補(bǔ)肺益腎方高、中、低劑量組和地塞米松組，每組12只。采用香煙熏吸聯(lián)合細(xì)菌反復(fù)感染法制備COPD穩(wěn)定期大鼠模型。從第9周開始，對照組、模型組給予生理鹽水灌胃，其余各組分別給予補(bǔ)肺益腎方

2、高、中、低劑量和地塞米松灌胃，共12周。于第20周給藥結(jié)束后取材。采用非束縛小動物肺功能測量儀每月檢測大鼠肺功能潮氣量（VT）、50％潮氣量呼氣流量（EF50）、呼氣峰流速（PEF）；采用HE染色法觀察大鼠肺與氣道組織病理變化；采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測大鼠血及BALF中T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）的變化；采用 FCM檢測大鼠肺單細(xì)胞懸液及BALF中DCs表面分子（OX62、MHCII、CD80、

3、CD86）的變化。結(jié)果
　　1.一般情況
　　模型組大鼠從造模第4周開始均出現(xiàn)明顯精神倦怠，形體消瘦，皮毛枯黃，活動量減少，進(jìn)食量減少等表現(xiàn)，給藥治療后，補(bǔ)肺益腎高、中、低劑量組及地塞米松組上述癥狀均有不同程度改善，其中以補(bǔ)肺益腎高、中劑量組較為明顯。各組大鼠的體重隨著周齡增長而逐漸增加，模型組大鼠的體重增長趨勢從14周開始較對照組減慢，從第12周開始補(bǔ)肺益腎高、中、低劑量組和地塞米松組大鼠體重的增長趨勢較模型組加快。補(bǔ)肺益

4、腎高、中、低劑量組和地塞米松組各組之間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.肺功能
　　模型組大鼠肺功能 VT、EF50、PEF從造模第4周開始較對照組明顯降低。補(bǔ)肺益腎高、中劑量組 VT、EF50、PEF水平自第16周起較模型組明顯升高；地塞米松組在第20周時EF50、PEF值升高。在20周的觀察期間，補(bǔ)肺益腎高、中、低劑量組和地塞米松組之間VT、EF50、PEF無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3.肺臟病理
　　第20周治療結(jié)束

5、后，模型組大鼠肺與氣道組織可見明顯病理性損傷和組織結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，肺泡壁融合形成大的肺泡腔，支氣管管腔變窄，氣道腔內(nèi)炎性細(xì)胞滲出，大量黏液阻塞，終末細(xì)支氣管遠(yuǎn)端氣囊腔膨脹間隔變薄，肺小動脈平滑肌增生，周圍炎性細(xì)胞浸潤。補(bǔ)肺益腎高、中、低劑量組和地塞米松組肺與氣道組織病理表現(xiàn)均較模型組有不同程度改善。
　　4.外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的變化
　　模型組外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平較對照組明顯降低，CD

6、8+水平明顯升高；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組CD4+、CD4+/CD8+水平較模型組升高，CD8+水平明顯降低；地塞米松組 CD8+水平較模型組和補(bǔ)肺益腎低劑量組降低；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組CD4+/CD8+水平較補(bǔ)肺益腎低劑量組明顯升高，CD8+水平降低；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組 CD4+、CD4+/CD8+水平較地塞米松組升高。各組之間CD3+的水平無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　5.BALF中T淋巴細(xì)胞亞群的變化
　　模型組BALF中CD8+

7、水平較對照組明顯升高，CD4+/CD8+水平明顯降低；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組CD8+水平較模型組降低；地塞米松組 CD8+水平較模型組降低；補(bǔ)肺益腎高劑量組 CD4+/CD8+較模型組升高，CD8+水平較補(bǔ)肺益腎低劑量組降低；補(bǔ)肺益腎高、中、低劑量組和地塞米松組之間CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　6.肺單細(xì)胞懸液中DCs表型的變化
　　模型組肺單細(xì)胞懸液中OX62+、OX62+MHCII+、OX6

8、2+CD80+、OX62+CD86+的表達(dá)較對照組明顯升高；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組OX62+、OX62+MHCII+、OX62+CD80+、OX62+CD86+的表達(dá)較模型組均明顯降低，較補(bǔ)肺益腎低劑量組和地塞米松組降低；補(bǔ)肺益腎低劑量組OX62+MHCII+、OX62+CD86+的表達(dá)較模型組降低；地塞米松組 OX62+、OX62+MHCII+、OX62+CD86+的表達(dá)較模型組降低。
　　7.BALF中DCs表型的變化
　

9、　模型組BALF中OX62+、OX62+MHCII+、OX62+CD80+、OX62+CD86+的表達(dá)較對照組明顯升高；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組 OX62+、OX62+MHCII+、OX62+CD80+、OX62+CD86+的表達(dá)較模型組明顯降低；地塞米松組OX62+、OX62+CD80+、OX62+CD86+的表達(dá)較模型組降低；補(bǔ)肺益腎高、中劑量組OX62+MHCII+、OX62+CD80+、OX62+CD86+的表達(dá)較補(bǔ)肺益腎低劑量組明

10、顯降低。
　　8.相關(guān)性分析
　　肺單細(xì)胞懸液懸液中OX62+與外周血中CD4+、CD4+/CD8+呈顯著負(fù)相關(guān)，與外周血中CD8+和BALF中CD3+、CD4+、CD8+呈顯著正相關(guān)；OX62+MHCII+與外周血中CD4+、CD4+/CD8+呈顯著負(fù)相關(guān)，與外周血中CD8+和BALF中CD3+、CD4+、CD8+呈顯著正相關(guān)；OX62+CD80+與外周血中CD4+、CD4+/CD8+呈顯著負(fù)相關(guān)，與外周血中CD8+和BA

11、LF中CD4+呈顯著正相關(guān)；OX62+CD86+與外周血中CD4+、CD4+/CD8+呈顯著負(fù)相關(guān)，與外周血中CD8+和BALF中CD3+、CD4+、CD8+呈顯著正相關(guān)。BALF中OX62+與外周血中CD4+、CD4+/CD8+呈顯著負(fù)相關(guān)；OX62+MHCII+與外周血CD8+呈正相關(guān)；OX62+CD80+與外周血中CD4+/CD8+呈顯著負(fù)相關(guān)，與外周血和BALF中CD8+呈顯著正相關(guān)；OX62+CD86+與外周血CD4+/CD8