調補肺腎三法對COPD大鼠T淋巴細胞亞群的調控作用及遠后效應.pdf

1、　　目的
　　1 評價調補肺腎三法(包括補肺健脾、補肺益腎和益氣滋腎法)對COPD的療效及其遠后效應,并探討其作用特點。
　　2 基于調補肺腎三法對穩(wěn)定期COPD大鼠細胞免疫功能的影響及遠后效應,探討補肺健脾方、補肺益腎方和益氣滋腎方治療COPD的機制,并揭示其遠后效應機制。
　　方法
　　大鼠隨機分為對照組、模型組、補肺健脾組、補肺益腎組、益氣滋腎組和氨茶堿組,每組20只。采用香煙熏吸聯合反復細

2、菌感染的方法制備COPD穩(wěn)定期大鼠模型,于第9周開始,對照組、模型組給予生理鹽水灌胃,其余各組分別給予相應藥物,給藥至第20周結束時,半數取材,剩余正常飼養(yǎng)至第32周結束時取材。檢測大鼠肺功能潮氣量(Tidal Volume,TV)、呼氣峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF)、50%潮氣量呼氣流量(50%Tidal Volume Expiratory Flow,EF50)；觀察肺組織病理變化；測定支氣管肺泡灌洗液(b

3、ronchio-alveoli lavage fluid, BALF)和外周血中白細胞(white blood cell,WBC)計數和中性粒細胞(P e r c e n t a g e o f neutrophils,NEU)比率；采用熒光直接標記法及流式細胞儀檢測 BALF及外周血中 T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+表達。結果
　　1 一般情況
　　模型組大

4、鼠精神倦怠,形體消瘦,飲水量、食量減退,活動少,墊料潮濕,大便溏薄等, 3個中藥組(補肺健脾組、補肺益腎組和益氣滋腎組,下同)和氨茶堿組可在不同程度改善上述變化,其中以補肺健脾組和補肺益腎組較為明顯。各組大鼠的體重隨周齡增長逐漸增加。模型組體重增長趨勢向較對照組緩慢( P>0.05)。第 12周起 3個中藥組和氨茶堿組體重自增長趨勢較模型組加快( P>0.05)。
　　2 肺功能
　　模型組 PEF、TV、EF50

5、水平從第 4 周開始較對照組明顯降低(P<0.05, P<0.01)。與模型組相比, 3 個中藥組自 16 周開始即可明顯改善 EF50 和 PEF水平(P<0.05,P<0.01),TV值自 20周開始明顯升高(P<0.05,P<0.01)；僅在第 20周和第 28周時,氨茶堿組 PEF值顯著升高( P<0.05)。在 32周觀察期間,3個中藥組和氨茶堿組間 PEF、TV、EF50水平無顯著差異(P>0.05)。3 外周血中WBC計數

6、及中性粒細胞比率
　　第 2 0、3 2周,對照組模型組外周血WBC計數和中性粒細胞比率較有升高趨勢,但無顯著統計學差異(P>0.05)。
　　4 肺泡灌洗液中WBC計數及中性粒細胞比率
　　第 20、32周,模型組 WBC計數均較對照組明顯升高( P<0.01),3個中藥組均較模型組顯著降低( P<0.01),補肺健脾組較氨茶堿組均明顯降低( P<0.05, P<0.01)；第 20周時,氨茶堿組較模型組

7、降低顯著( P<0.05)；第 32周時,氨茶堿組無顯著差異( P>0.05),補肺益腎組和益氣滋腎組降低明顯( P<0.05)。3 個中藥組間無統計學差異( P>0.05 )。各組間中性粒細胞比率無明顯差異(P>0.05)。
　　5 肺臟病理損傷評分
　　第 20、32 周時,模型組肺組織病理損傷程度評分較對照組明顯升高(P<0.01),3個中藥組和氨茶堿組較模型組明顯降低(P<0.01)；第 32周時, 3個中藥

8、組較氨茶堿組降低( P<0.05,P<0.01),補肺健脾組較益氣滋腎組肺組織病理損傷程度評分明顯降低( P<0.05)。
　　6 外周血中 T淋巴細胞亞群( CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+
　　第 20、32 周時,模型組外周血中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平較對照組明顯降低( P<0.05,P<0.01),3個中藥組和氨茶堿組外周血中 CD3+、C

9、D4+、CD8+、CD4+CD25+水平較模型組升高( P<0.05, P<0.01)；3 個中藥組外周血中 CD3+水平較氨茶堿組明顯升高(P<0.05,P<0.01)；補肺健脾組外周血中 CD4+較補肺益腎組和益氣滋腎組明顯升高( P<0.01)。第 20周時,3個中藥組外周血中 CD4+水平較氨茶堿組明顯升高( P<0.05,P<0.01)；模型組外周血中 CD4+/CD8+水平較氨茶堿組升高( P<0.05),補肺健脾組 CD4

10、+/CD8+水平較益氣滋腎組和氨茶堿組升高( P<0.05,P<0.01)。第 32周時,補肺健脾組和補肺益腎組外周血中 CD4+水平較氨茶堿組升高(P<0.05,P<0.01)；模型組外周血中 CD4+/CD8+水平較對照組明顯降低(P<0.01),3 個中藥組和氨茶堿組CD4+/CD8+水平較模型組升高( P<0.05),補肺健脾組 CD4+/CD8+水平較氨茶堿組升高( P<0.05)。
　　7 BALF中 T淋巴細胞亞

11、群( CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+
　　第 20、32周時, 模型組 BALF中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平較對照組明顯降低(P<0.05,P<0.01),3 個中藥組和氨茶堿組 BALF 中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平較模型組明顯升高( P<0.05, P<0.01)；3 個中藥組 BALF中 CD3+較氨茶堿組明顯升高( P<0

12、.05,P<0.01)；補肺健脾組 BALF中 CD4+較補肺益腎組和益氣滋腎組明顯升高( P<0.01)。第 20 周時,補肺健脾組和補肺益腎組 BALF中 CD4+水平較氨茶堿組明顯升高( P<0.01)；模型組BALF 中 CD4+/CD8+水平較氨茶堿組升高( P<0.05),補肺健脾組 CD4+/CD8+水平較益氣滋腎組和氨茶堿組升高(P<0.05,P<0.01)。第 32周時,補肺健脾組和補肺益腎組 BALF中 CD4+水平

13、較氨茶堿組升高(P<0.05,P<0.01)；模型組 BALF 中 CD4+/CD8+水平較對照組明顯降低( P<0.01), 3 個中藥組和氨茶堿組 BALF 中 CD4+/CD8+水平較模型組升高( P<0.05, P<0.01),補肺健脾組BALF中 CD4+/CD8+水平較益氣滋腎組和氨茶堿組升高( P<0.05)。
　　8 相關性分析
　　第 20周時,肺組織病理損傷程度與外周血中 CD3+( r=-0.5

14、60,P=0.000)、外周血中 CD4+( r=-0.541,P=0.001)、外周血中 CD8+( r=-0.563,P=0.000)、外周血中 CD4+CD25+(r=-0.410,P=0.013)呈顯著負相關；肺組織病理損傷程度與 BALF中 CD3+(r= - 0.564,P=0.000)、BALF中 CD4+(r= - 0.531, P=0.001)、BALF中CD8+( r=-0.564,P=0.000)、BALF中CD4

15、+CD25+( r=-0.398, P=0.016)呈顯著負相關。第 32 周時,肺組織病理損傷程度與外周血中 CD3+( r=-0.747,P=0.000)、外周血中 CD4+( r=-0.719,P=0.000)、外周血中 CD8+( r=-0.710,P=0.000)、外周血中 CD4+/CD8+( r=-0.576,P=0.000)、外周血中 CD4+CD25+( r=-0.666,P=0.000)呈顯著負相關；32周肺組織病理

16、損傷程度與 BALF中 CD3+(r=-0.749,P=0.000)、BALF中 CD4+(r=-0.720,P=0.000)、BALF中CD8+(r=-0.702,P=0.000)、BALF中CD4+/CD8+(r=-0.617,P=0.000)、BALF中 CD4+CD25+(r= - 0.692,P=0.000)呈顯著負相關。
　　結論
　　1補肺健脾方、補肺益腎方和益氣滋腎方可以明顯改善COPD穩(wěn)定期大鼠一般