匹多莫德抑制小鼠弓形蟲隱性感染活化的機(jī)制.pdf

1、目的:人類感染弓形蟲可以通過經(jīng)口感染或者經(jīng)胎盤垂直傳播感染。在宿主免疫機(jī)能正常情況下,感染的弓形蟲在機(jī)體內(nèi)多形成休眠狀態(tài)的組織包囊,呈隱性感染狀態(tài),同時(shí)刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。但在宿主免疫損傷或防御機(jī)能下降時(shí),弓形蟲可突破包囊形成急性感染,導(dǎo)致宿主發(fā)病和死亡,如HIV/AIDS患者可繼發(fā)弓形蟲性腦炎,甚至致死;惡性腫瘤放化療、器官移植使用免疫抑制劑時(shí),都可使隱性感染轉(zhuǎn)為急性或亞急性,出現(xiàn)嚴(yán)重的全身性弓形蟲病?，F(xiàn)已證明,弓形蟲感染后機(jī)體的免

2、疫是以細(xì)胞介導(dǎo)為主的細(xì)胞免疫,參與機(jī)體免疫反應(yīng)的主要有巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞及其多種細(xì)胞因子。本研究試圖通過糖皮質(zhì)激素地塞米松(Dexamethasone,Dem)建立隱性弓形蟲感染活化的模型;利用匹多莫德(Pidotimod,PT)恢復(fù)免疫抑制小鼠的免疫功能;觀察不同處理組宿主蟲血癥以及存活時(shí)間的變化,檢測匹多莫德對小鼠CD4+T細(xì)胞亞群以及相關(guān)細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié),觀察小鼠脾臟T細(xì)胞亞群在匹多莫德降低小鼠經(jīng)Dem誘導(dǎo)弓形蟲隱性感染

3、活化中的作用。
　　方法：120只BALB/c小鼠每鼠經(jīng)口灌胃給予30個(gè)TgCtwh6株(基因型China1)弓形蟲包囊,4W后形成穩(wěn)定的弓形蟲隱性感染。小鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射免疫抑制劑Dem誘導(dǎo)免疫抑制動物模型,每鼠按6mg?kg-1?d劑量腹腔注射Dem。實(shí)驗(yàn)組又分為PT處理組和非PT處理組,在給予Dem同時(shí)每鼠100mg?kg-1?d劑量灌胃給予PT,對照組給予生理鹽水。每組隨機(jī)抽取10只小鼠用于監(jiān)測生存

4、指數(shù)。所有小鼠SPF級環(huán)境飼養(yǎng),在所有小鼠飲水中加入阿莫西林克拉維酸,濃度為1.0g/L預(yù)防細(xì)菌感染。觀察不同處理組小鼠的存活時(shí)間。分別在感染后0w,1w,2w,3w,4w,5w,6w,7w,8w和9w每組各麻醉處死3只小鼠。取外周血提取全血DNA,熒光定量PCR檢測弓形蟲DNA,監(jiān)測蟲血癥;比較PT對隱性感染活化時(shí)的蟲血癥變化的影響;流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測不同處理組小鼠脾淋巴細(xì)胞CD4+T細(xì)胞亞群,分析PT對免疫抑制狀態(tài)下T細(xì)胞免

5、疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用;流式微球陣列技術(shù)(CBA)檢測血清Th1、Th2以及Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子,比較PT對免疫抑制狀態(tài)下細(xì)胞因子表達(dá)譜的影響;取不同處理組小鼠腦組織,觀察PT對免疫抑制狀態(tài)下腦組織病理變化以及熒光定量PCR檢測弓形蟲核酸比較不同處理組小鼠腦組織蟲荷的差異。
　　結(jié)果：與Dem+NS組存活率45％相比,PT干預(yù)的Dem+PT組小鼠存活率80%,明顯高于Dem+NS組(n=3,:p<0.05);Dem+PT組蟲血癥出現(xiàn)

6、在給Dem后第3周,比Dem+NS組蟲血癥出現(xiàn)在給藥后2周時(shí)間明顯延遲(n=3,**:p<0.05),Dem+PT組腦組織蟲荷明顯降低,僅為Dem+NS組的1%(n=3,**:p<0.01);FCM與小鼠血清細(xì)胞因子檢測結(jié)果顯示,Th1和Treg細(xì)胞比例得到恢復(fù)(n=3,**:P<0.01;***:P<0.001),而Th2細(xì)胞未見變化。
　　結(jié)論：匹多莫德能夠顯著上調(diào)地塞米松誘導(dǎo)的免疫抑制,顯著減輕蟲荷,延長病鼠生存時(shí)間;明顯改