仙臺(tái)病毒缺損干擾顆?？勾笫竽X膠質(zhì)瘤初步研究.pdf

1、目的:鑒于仙臺(tái)病毒Tianjin株對(duì)成年人的低致病性，以及先前的實(shí)驗(yàn)表明仙臺(tái)病毒其它基因型對(duì)腫瘤有抑制作用。本課題擬通過(guò)仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)影響，探索不必外源基因的表達(dá)載體和不必具有直接溶瘤能力的病毒，利用仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒輔助治療腫瘤的方法。并且初步研究其治療腫瘤的機(jī)理，以期為腫瘤治療提供新的思路。
　　方法:1.敏感細(xì)胞的篩選:向所選定的癌細(xì)胞株:A549、MEL526、Li

2、br、C6、HT29、SW480、A498接種活仙臺(tái)病毒Tianjin株，通過(guò)細(xì)胞CPE、細(xì)胞成活率、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞培養(yǎng)液TCID50、PCR等形態(tài)學(xué)、生物學(xué)和分子生物學(xué)方法確定對(duì)該病毒敏感的細(xì)胞系。2.仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒的制備:仙臺(tái)病毒Tianjin株通過(guò)雞胚培養(yǎng)法擴(kuò)增，超速離心純化仙臺(tái)病毒Tianjin株活病毒，超速離心蔗糖密度梯度分離缺損干擾顆粒，提純出的缺損干擾顆粒使用雞胚培養(yǎng)法驗(yàn)證是否能夠繼續(xù)增殖，如果不能增

3、殖則為仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒。3.使用仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒按不同濃度接種DC細(xì)胞，檢測(cè)DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、TNF-α、IFN-α等有抗腫瘤作用的細(xì)胞因子的量，驗(yàn)證仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒刺激DC細(xì)胞抗腫瘤的能力。4.使用確定出的敏感細(xì)胞系接種適宜的動(dòng)物，制作荷瘤動(dòng)物模型。腫瘤內(nèi)接種仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒，通過(guò)直接測(cè)量腫瘤大小、細(xì)胞因子檢測(cè)、PCR、免疫組化等方法評(píng)估仙臺(tái)病毒Tia

4、njin株缺損干擾顆粒治療腫瘤的可行性，并初步確定治療的機(jī)理。
　　結(jié)果:大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株對(duì)仙臺(tái)病毒Tianjin株最具高度敏感性，病毒TCID50達(dá)到11.24±0.08.其它被測(cè)試細(xì)胞株均未達(dá)到此值，一般在0～3之間。由此確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為大鼠，品種為Wistar大鼠。在促進(jìn)DC細(xì)胞體外增值實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組比較，仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒可以刺激DC細(xì)胞產(chǎn)生抗癌作用的細(xì)胞因子，IL-6、TNF-α、IFN-α有明顯

5、升高（均為P＜0.001）。在大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組比較，仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆?？梢源碳ふ４笫蟾弑磉_(dá)有抗癌作用的細(xì)胞因子，IL-6、TNF-α、IFN-α有明顯升高（均為P＜0.001）。大鼠腦瘤模型造模失敗。
　　結(jié)論:大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株對(duì)仙臺(tái)病毒Tianjin株高度敏感。仙臺(tái)病毒Tianjin株接種C6細(xì)胞后可引起細(xì)胞明顯病變，促進(jìn)凋亡，并且作用持續(xù)。仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆?？梢源龠M(jìn)樹(shù)突細(xì)胞成