中藥骨碎補(bǔ)對成骨細(xì)胞的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：骨碎補(bǔ)是臨床上常用的一味強(qiáng)骨中藥，最近的研究發(fā)現(xiàn)它可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察雌激素受體及MAPK、PI-3K信號通路在骨碎補(bǔ)促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化過程中的影響。同時首次探討骨碎補(bǔ)對成骨細(xì)胞OPG/RANKL系統(tǒng)表達(dá)的影響。 方法：采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)法和3H-DR摻入法觀察骨碎補(bǔ)對小鼠成骨細(xì)胞系MC3T3一E1增殖的影響.堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性、骨鈣素(osteoca

2、lcin，OC)和I型膠原的表達(dá)均采用ELISA法檢測。使用茜素紅染色法觀察骨碎補(bǔ)對細(xì)胞礦化的影響，氯化十六烷基嘧啶提取染色茜素紅，540 nm分光光度測定法測定提取液，量化礦化結(jié)節(jié)染色結(jié)果。用Western-blot檢測護(hù)骨素(OPG)的蛋白表達(dá)量，用ELISA法檢測NF-kB受體活化因子配體(RANKL)蛋白的分泌。 結(jié)果：(1)骨碎補(bǔ)可以促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞DNA的合成。(2)骨碎補(bǔ)可以增加細(xì)胞內(nèi)ALP活性，促進(jìn)I型膠

3、原的合成和分泌，但對骨鈣素的表達(dá)和分泌量無影響。(3)骨碎補(bǔ)可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的礦化。(4)雌激素受體拮抗劑ICI182780及ERK、PI-3K信號通路的阻斷劑能抑制骨碎補(bǔ)促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞增殖的作用。(5)雌激素受體拮抗劑ICll82780及ERK、P38信號通路的阻滯劑能抑制骨碎補(bǔ)促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞ALP表達(dá)的作用。(6)通過Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)可以促進(jìn)OPG的表達(dá)。(7)ELISA方法證明骨碎補(bǔ)對RA