甘藍(lán)型黑、黃籽油菜種皮蛋白質(zhì)差異表達(dá)研究.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文甘藍(lán)型黑、黃籽油菜種皮蛋白質(zhì)差異表達(dá)研究姓名：萬華方申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：梁穎20050501劍，沒煮檢測(cè)要4極酸性(雄《)或者掇堿性瞧◇llO)爨囊艨。燕站撿測(cè)豹蛋囊震遴孬比塒時(shí)發(fā)現(xiàn)，鑄個(gè)相同發(fā)商時(shí)期都有相當(dāng)數(shù)量的蛋白質(zhì)可以匹配，這表明近簿基因系的甘藍(lán)型黃、黑籽鈉菜在相同的發(fā)育時(shí)期時(shí)，生理代謝有很高的相似性同時(shí)，在相同的發(fā)育時(shí)期，LI和L2都有備自酶特異簧自點(diǎn)，雖這些特異點(diǎn)在等電點(diǎn)上存在著狠大

2、豹差舅。Ll靜特異煮戔要集串在羧裎范圍，褥L2瓣特羚點(diǎn)列倍寓予堿毪臻。4從Ll、L2各自不同發(fā)育時(shí)期種皮蛋白雙向電泳圖譜及相應(yīng)的點(diǎn)匹配報(bào)告可以看出，在發(fā)育過程中，種皮蛋白點(diǎn)的數(shù)目是先上升，到開花后32天達(dá)最高值，隨后開始下降。發(fā)育過程中相鄰近的兩個(gè)發(fā)育時(shí)期的蛋白圖譜中都可以有一定數(shù)目的蛋白點(diǎn)可以匹配。這些點(diǎn)隨著發(fā)育進(jìn)程出現(xiàn)表達(dá)的上調(diào)或者是下調(diào)，同時(shí)也有部分蛋白點(diǎn)在相鄰的兩個(gè)發(fā)育時(shí)期的表達(dá)相當(dāng)。種子逐漸發(fā)育成熟時(shí)，相鄰兩發(fā)育時(shí)期那些可以匹

3、配的點(diǎn)的等電點(diǎn)有向堿性端偏移的趨勢(shì)相鄰兩發(fā)育時(shí)期的圖譜上，圖譜都有各自的特異點(diǎn)。這些特異點(diǎn)的分布也存在著一個(gè)現(xiàn)象：較早的發(fā)育時(shí)期的圖譜的特異點(diǎn)偏向于酸性端。發(fā)育期靠后的那個(gè)發(fā)育時(shí)期圖譜的特異點(diǎn)則偏向于堿性端。5以3對(duì)黃籽和黑籽近等基因系為試材。在開花后柏天時(shí)，分別取黑籽(L1、L3、L5)和黃籽(L2、L4、L6)種皮蛋白質(zhì)混合樣進(jìn)行雙向電泳pH58)。選擇黃籽種皮和黑籽種皮表達(dá)量較大的特異蛋白質(zhì)點(diǎn)各一個(gè)，經(jīng)胰蛋白酶解，應(yīng)用MALDI=

4、TOFMS方法對(duì)其進(jìn)行裝定，獲得質(zhì)量肽指紋圖譜。將質(zhì)譜所測(cè)膚質(zhì)量指紋譜數(shù)據(jù)輸入網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用程序Mascot(http：／／wwwexpasyorR／tools)進(jìn)行檢索，并將肽質(zhì)量指紋譜數(shù)據(jù)與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)匹配，結(jié)合雙向電泳所得的分子量及pI信息，初步鑒定出黃籽種皮特異蛋白質(zhì)為鈣調(diào)磷酸酶(Calcineurin。CN)，其pI值為555，分子量為26012kD。與雙向電泳測(cè)定結(jié)果差異不大。而黑籽種皮特異蛋白質(zhì)肽質(zhì)量指紋譜結(jié)果噪音高t效果差，沒