15309.蕪菁myb75和tt8在花青素合成途徑中相互作用的分析

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S13162學(xué)位論文蕪菁MYB75和TT8在花青素合成途徑中相互作用的分析指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：王冠杰李玉花教授碩士2013年4月東北林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)論文答辯日期：2013年6月授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：李景富論文評(píng)閱人：王晶英秦智偉聾立厶櫛素大學(xué)摘要摘要轉(zhuǎn)錄因子在植物整個(gè)生長發(fā)育過程中，起著重要的作用。其通過各自不同的功能域與DNA以及其他蛋白發(fā)生

2、相互作用，從而激活或抑制相關(guān)基因的表達(dá)。MYB類轉(zhuǎn)錄因子和bHLH類轉(zhuǎn)錄因子為植物中兩類重要的家族蛋白，在植物花青素的合成、抵抗生物或非生物的脅迫、調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)等方面起著重要的作用。本文以光敏感型津田蕪菁為試驗(yàn)材料，對(duì)已克隆的BrMYB75和BrTT8轉(zhuǎn)錄因子基因，進(jìn)行表達(dá)水平的檢測、亞細(xì)胞定位檢測、瞬時(shí)表達(dá)調(diào)控檢測、酵母雙雜交檢測等。分析蕪菁花青素合成過程中以及光誘導(dǎo)過程BrMYB75和BrTT8蛋白對(duì)BrCHSl表達(dá)的調(diào)控作用

3、，同時(shí)構(gòu)建BrMYB75和BrTT8的過量表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，分子檢測陽性轉(zhuǎn)基因的煙草和番茄植株，分析BrMYB75和BrTT8對(duì)花青素合成的調(diào)控，為進(jìn)一步研究MYB類$1bHLH類轉(zhuǎn)錄因子功能提供了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1、MYB75與TT8轉(zhuǎn)錄因子與植物花青素的合成相關(guān)，且MYB75與TT8的組織特異性和光誘導(dǎo)特異性表達(dá)一致。2、成功構(gòu)建含有GFP熒光蛋白的重組表達(dá)載體GFPBrMYB75和GFPBrTT8，洋蔥表

4、皮瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果表明BrMYB75蛋白和BrTT8蛋白均定位于細(xì)胞核。3、成功構(gòu)建表達(dá)載體Y2HBDBrMYB75和Y2HADBrTT8，轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)，酵母雙雜交結(jié)果表明只有實(shí)驗(yàn)組的酵母菌斑呈現(xiàn)藍(lán)色，其他菌斑均呈現(xiàn)白色。說明BrMYB75和BrTT8蛋白具有相_百作用。4、成功構(gòu)建OEBrMYB75和OE—BrTT8過量表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，將其與含有BrCHS啟動(dòng)子的熒光素酶載體的農(nóng)桿菌菌種混合，共同瞬時(shí)轉(zhuǎn)染煙草葉片。結(jié)果表明MYB7

5、5和TT8協(xié)同調(diào)控CHS啟動(dòng)子的活性，而單獨(dú)的MYB75或TT8對(duì)CHS啟動(dòng)子的活性影響較小，說明MYB75和TT8對(duì)CHS基因的表達(dá)有調(diào)控作用。5、利用Gateway的方法成功構(gòu)建無抗生素標(biāo)記植物表達(dá)載體pCAMBIAl301一PMI—BrMYB7531pCAMBIAl301一PMI—BrTT8，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化番茄和煙草。用含有甘露糖的選擇培養(yǎng)基篩選不定芽，篩選陽性植株。提取植株DNA進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果表明初步獲得了轉(zhuǎn)基因