16684.人類(lèi)ampk的kd和aid結(jié)構(gòu)域及自噬相關(guān)因子atg5的表達(dá)純化和核磁共振研究

1、北京大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和使用授權(quán)說(shuō)明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品或成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名：7萬(wàn)躉豇～日期：腳△年以月／日學(xué)位論文使用授權(quán)說(shuō)明(必須裝訂在提交學(xué)校圖書(shū)館的印刷本)本人完全了解北京大學(xué)關(guān)于收集

2、、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)，在校園網(wǎng)上提供服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝?、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；因某種特殊原因需要延遲發(fā)布學(xué)位論文電子版，授權(quán)學(xué)?？谝荒辏趦赡辏谌暌院?，在校園網(wǎng)上全文發(fā)布。(保密論文在解密后遵守此規(guī)定)者警碑聊妣及日期：乃／三年／Z月么日’Ⅲ㈣㈣0㈣Ⅷ舢1㈣10Y2499530人類(lèi)的AMPK的KD和

3、AlD結(jié)構(gòu)域及自噬相關(guān)因子ATG5的表達(dá)純化和核磁共振研究摘要：本課題以?xún)蓚€(gè)細(xì)胞代謝通路中有重要作用的人源蛋白hATG5和I認(rèn)MPKa2為研究對(duì)象，擬在通過(guò)目的蛋白的片段選取、表達(dá)純化和初步的NMR研究，為兩個(gè)目的蛋白的溶液結(jié)構(gòu)研究提供了基本材料和數(shù)據(jù)。AMPK(AMPd印endentⅪnase)是真核生物普遍存在且序列保守的細(xì)胞能量感受器和調(diào)節(jié)器，是細(xì)胞中主要產(chǎn)能和耗能的代謝通路的調(diào)節(jié)樞紐。它能敏感地監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)AMP／ATP比率，根據(jù)

4、細(xì)胞對(duì)能量的需求和能量的儲(chǔ)備狀態(tài)，調(diào)控包括糖代謝，脂代謝和蛋白制合成等幾大代謝通路。高等真核生物的AMPK分為、B、Y三個(gè)亞基，其中亞基是AMPK被激活和發(fā)揮激酶功能直接相關(guān)的亞基，該亞基上的催化結(jié)構(gòu)域(鼬naSeDomain，KD)能夠被上游的激酶磷酸化從而發(fā)揮AMPK的激酶功能，然而在沒(méi)有激活外因時(shí)，KD會(huì)被同一亞基上的自抑制結(jié)構(gòu)域(Auto—i11llibitingDomain，AID)抑制。人源—蝴PK(MPK)作為包括糖尿病藥

5、、減肥藥物的靶標(biāo)一直倍受關(guān)注。這些藥物都是通過(guò)使AMPK激活來(lái)發(fā)揮功能，但都是問(wèn)接的方式。因此，揭示人源AMPK亞基的自抑制結(jié)構(gòu)域(AID)對(duì)催化結(jié)構(gòu)域(KD)的抑制機(jī)理，是設(shè)計(jì)針對(duì)AMPK的新藥的關(guān)鍵一步。本課題以主要分布于人的肝臟、肌肉和心臟的AMPKQ2亞型(hAMPK_q2)的KD和AID結(jié)構(gòu)域?yàn)檠芯繉?duì)象，通過(guò)設(shè)計(jì)KD和AID片段的原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)純化出KD和AID的目的蛋白。使用提取出的目的蛋白，進(jìn)行了NMR一維1H譜和